184612. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új szomatosztatin-tipusú ciklopeptidek előállítására
1 184 612 2 pentoxid felett szárítjuk. Ezt a terméket még kétszer átcsapjuk 20 ml metanolból és 50 ml éter elegyéből, majd szüljük, és vákuumban szárítjuk. A racemizálási teszt (totálhidrolízis, az aminosavak származékainak elkészítése és szétválasztása gázkromatográfiásán) szerint ebben a termékben az aminosavaknak kevesebb mint 2 %-a van D-konfigurációban. Vékonyrétegkromatogram: kloroform-metanol-ecetsav-víz (70:40 :0,5 :10), Rf = 0,50. 1.6 művelet Z-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-OTmse 632 mg Z-Asn-Phe-Phe-OH (1.5A művelet) és 862 mg H-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-OTmse (1.5 művelet) 5 ml dimetilformamiddal készített oldatához 210 mg N-hidroxi-benzotriazolt és 276 mg DCCI-et adunk, és a reakciókeveréket 15 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután a kivált diciklohexílkarbamidot kiszűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk. Az olajos maradékot 5 ml metanollal eldörzsöljük, és leszívatjuk. Az oldhatatlan anyagot tisztítás céljából 5 ml metanolban 50°-on mégegyszer eldörzsöljük, leszívatjuk, metanollal mossuk, és vákuumban szárítjuk. A termék vékonyrétegkromatográfiásan egységes. Vékonyrétegkromatogram: kloroform-metanol (85:15), Rf = 0,85, kloroform-metanol-víz (14:6:1) Rf = 0,90. 1.7 művelet Z-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-OH 940 mg Z-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)Phe-OTmse (1.6 művelet) védett peptidet 23 ml frissen készített vízmentes, dimetilformamidos 0,15 mólos tetraetilammóniumfluorid-oldatban feloldunk, és az oldatot 30 percig 25°-on tartjuk. Ezután a reakciókeveréket 5 -ra lehűtjük, és alapos keverés közben 0,68 ml 1 n vizes sósavoldatot adunk hozzá, majd a terméket 70 ml víz hozzáadásával kicsapjuk. A kiszűrt anyagot 5 ml vízzel mossuk, vákuumban foszforpentoxid felett szárítjuk, és közvetlenül felhasználjuk az 1.8 művelethez. 1.7A művelet H-Gaba-OBzl-p-toluolszulfonát 30,94 g 4-aminovajsav és 68,48 g p-toluolszulfonsavmonohidrát keverékét 311 ml benzilalkoholban és 300 ml benzolban normál nyomáson lassan desztilláljuk, míg 5 óra alatt összesen 200 ml 70-90° forráspontű frakciót gyűjtünk össze. A tiszta reakcióoldatot vízlégszivattyúval létesített vákuumban, majd nagyvákuumban kb. 60°-on 150 ml-re bepároljuk. A kiváit kristálykását 250 ml éterrel elkeverjük, a kristályokat kiszűrjük, és 200 ml éterrel mossuk. További tisztítás céljából ezt a terméket szobahőmérsékleten 500 ml éterrel 1 órán át keverjük, majd kiszűrjük, éterrel mossuk, és vákuumban szárítjuk. A termék olvadáspontja 106-107,5°. Vékonyrétegkromatogram: ki o roform-metanol-17 %-os vizes ammőniumhidroxid-víz (50 :40:6 :4), Ff = 0,39. 1.8 művelet Z-A sn -Phe-Phe-(D- Trp )-Lys (Boc)■ Thr(But)Phe-Gaba-OBzl 430 mg Z-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)Phe OH (1.7 művelet) és 82 mg Gaba-benzilészter (0.046 ml N-ntetil-morfolin hozzáadásával 152 mg megfelelő p-toluolszulfonátból felszabadítva, lásd 1.7A művelet) keverékéhez 2 ml dimetilformamidban 61 mg N-hidroxi-benzotriazolt és 93 mg DCCI-et adunk, és a reakciókeveréket 20 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután a keverékhez 10 ml jéghideg metanolt adunk, és szűrjük. Az így kapott szilárd anyagot tisztítás céljából 5 ml meleg metanollal 10 percig keverjük, a szuszpenziót 0°-ra lehűtjük, a tiszta terméket kiszűrjük, és vákuumban szárítjuk. Vékonyrétegkromatogram: kloroform-metanol (85:15), Rf = 0,85. 1.9 művelet 11-A sn-Phe-Phe-(.D- Trpj-Lys ( Boc)- Thr( But)Phe-Gaba-OH 380 mg Z-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)Phe Gaba-OBz) (1.8 művelet) 25 ml dimetilformamiddal készített oldatához 50 mg 10%-os palládiuinozott/szén katalizátort adunk, és 6 órán át szobahőmérsékleten és normál nyomáson hidrogénezzük. Ezután a katalizátort kis7űijük, és az oldatot nagyvákuumban 2 ml-re bepároljuk, majd a terméket 25 ml peroxidmentes éterrel kicsapjuk, kiszűrjük, és vákuumban szárítjuk. A nyersterméket további tisztítás nélkül használjuk fel a következő 1.10 művelethez (ciklizálás). 1.10 művelet —~ \sn-Phe-Phe-(D-T rp)-Ly s (Boc )-Thr(B ut )-Phe-Gaba — 297 mg nyers H-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)Thi(But)-Phe-Gaba-OH (1.9 művelet), 324 mg N-hidroxi-benzotriazol és 495 mg DCCI 240 ml dimetilformamiddal készített oldatát 20 órán át 50°-on tartjuk. Ezután az oldószert nagyvákuumban kb. 30°-on ledesztilláljuk, és a maradékot 10 ml etilacetáttal eldörzsöljük. A kivált diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, a szűrletet etilacetáttal 50 ml-re hígítjuk, 20-20 ml 1 n vizes oxálsawal háromszor mossuk, majd vízzel semlegesre mossuk, vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A nyersterméket metanol-víz-kloroform-széntetraklorid (2700:675:900:1575 térfogatrész) rendszerben 460 lépcsőben ellenáramú megoszlásnak alávetve tisztítjuk. A 198—240 frakcióban lévő fázisokat (K = 0,88) egyesítjük, és vákuumban bepároljuk. A ma-9 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
