184612. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új szomatosztatin-tipusú ciklopeptidek előállítására
1 184 612 2 2.6 művelet ~ . Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-Gaba-Gaba — Az 1.10 műveletben leírtak szerint a H-Asn-Phe-Phe(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-Gaba-Gaba-OH-at (2.5 művelet) DCCI-del és 1-hidroxi-benzotriazollal ciklizáljuk. A nyersterméket ellenáramú megoszlásnak (K = 1,1) alávetve tisztítjuk. Vékonyrétegkromatogram: kloroform-metanol (85:15), Rf = 0,06, kloroform-metanol-víz (14:6:1), Rf = 0,69. 3. példa I-~Äsn-Phe-(D-Trp)-Lys-Thr-Phe — Az 1. példában leírtakhoz hasonló módon kezeljük az L Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe védett pepiidet trifluorecetsawal, és az így kapott terméket feldolgozzuk. Az előállítani kívánt anyagot 220 lépcsőben ellenáramú megoszlásnak (K = 3,4) alávetve amorf anyagként kapjuk. Vékonyrétegkromatogram: 101. rendszer: Rf = 0,60, 111B rendszer: Rf = 0,37, 112A rendszer: Rf = 0,50. A kiindulási anyagként alkalmazott fenti képletű védett peptidet a következőképpen állítjuk elő: 1,10 g Z-Asn-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe- OH-t (1.7 művelet) 30 ml dimetilformamidban 100 mg 10%-os palládiumozott/szén jelenlétében a Z-csoport tökéletes lehasításáig hidrogénezünk (kb. 4 óra, vékonyrétegkromatográfiás ellenőrzés). Ezután a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet nagyvákuumban 15 ml-re bepároljuk, és a H-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe- OH képletű peptid így kapott oldalát az 1.10 műveletben leírtak szerint DCCI-del és n-hidroxi-benzotriazollal ciklizáljuk. A nyersterméket ellenáramú megoszlással (K=0,71) tisztítjuk, így az Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe —^ védett ciklopeptídet kapjuk. Vékonyrétegkromatogram: kloroform-metanol-víz (14:6:1), Rf=0,83. 4. példa % Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys-Thr-Phe-NH(CH2)4CO ^ Az 1. példában leírtak szerint az •Asn-Phe-Phe-(D-Trp) - Ly s(Bo c)-Thr(But)-Phe-N H- (CH2 ) 4 CO védett peptidet trifluorecetsawal kezeljük, és feldolgozzuk. Az előállítani kívánt terméket 220 lépcsőben ellenáramú megoszlásnak (K — 3,31) alávetve amorf anyagként kapjuk. Vékonyrétegkromatogram: 101. rendszer: Rf = 0,29, 111B rendszer: Rf = 0,34, 112A rendszer: Rf = 0,47. A kiindulási anyagként alkalmazott védett peptidet a következőképpen állítjuk elő: 4.1 művelet H-Asn-Phe-Phe {D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-OTmse 942 mg Z-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)Phe-OTmse-t (1.6 művelet) 50 ml dimetilformamidban 100 mg 10%-os palládiumozott/szén jelenlétében hidrogénezünk, amíg a Z-csoport teljesen lehasad (kb. 2 óra, vékonyrétegkromatográfiás ellenőrzés). A katalizátort kiszűrjük, a szűrletet nagyvákuumban 4 ml-re koncentráljuk, és így használjuk a következő művelethez. 4.2 művelet • Z-NH-( CH-,)a CO-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)Thr(But)-Phe-OTmse 188 mg 5-benziloxikarbonil-aminopentánsav, 847 mg nyers heptapeptid (4.1 műveletből) és 101 mg N hidroxibenzotriazol 4 ml dimetilformamiddal készített oldatához 0-5°-on 182 mg DCC1 1 ml dimetilformamiddal készített oldatát adjuk. A reakciókeveréket 15 percig 0-5°-on, majd 18 órán át szobahőmérsékleten tartjuk, és a kivált diciklohexilkarbamidot kiszűrjük. A szűrletet nagyvákuumban 3 ml-re koncentráljuk, és a nyersterméket 60 ml víz hozzáadásával kicsapjuk. A terméket szüljük., és szárítjuk, majd 20—20 ml metanollal 40°-on elkeverve kétszer tisztítjuk és szűrjük. Vékonyrétegkromatogram: kloroform-metanol (85:15), Rf = 0,61, kloroform-metanol-víz (14:6:1), Rf = 0,89. 4.3 művelet Z-NH-( CH2)aCO-A sn-Ph e-Phe-( D-Trp )-Lys (Boc)Thr(But)-Phe-OH 760 mg Z-NH (CH2 )4 CO-Asn-Phe-Phe-(D-T rp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-OTmse-t (4.2 művelet) 17,1 ml frissen készített 0,15 mólos dimetilformamidos tetraetilammóniumfluorid-oldatban feloldunk, és az oldatot 40 percig szobahőmérsékleten tartjuk. Ezután a reakciókeveréket 0-5°-ra lehűtjük, 0,51 ml 1 n vizes sósavat hozzáadva alaposan átkeverjük, és a terméket 80 ml víz hozzáadásával kicsapjuk. Vékonyrétegkromatogram: kloroform-metanol (85:15), Rf = 0,13, kloroform-metanol-víz (14:6:1), Rf = 0,65. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
