184490. lajstromszámú szabadalom • Eljárás extracelluláris anyagot termelő sejtek előállítására
1 184 490 2 előrehaladtával a 6—7. napon a telep közepén átlátszó „lyuk” képződik, ahol a sűrű folyadékban kevés sejt van. A nyálkába ágyazott sejtek általában rövidebbek, mint normálisan. A sejtek nem pusztulnak el a nyálkatermelés folyamán. A nyálkába ágyazott sejteket ismét MM agaron szélesztve a telepképzés és a nyálkatermelés a fenti módon ismétlődik rneg. Szacharóz mentes MM agaron a telepképzés gyengébb, nyálkatermelés nincs. BP + 5% szacharóz agaron ismételt passzálással egyes esetekben a normál telepek a 4—5. naptól a fent leírthoz hasonló módon nyálkát termelnek. Az A2 sejtek minden táptalajon Gram pozitívok és kataláz pozitívok. A törzs stabilan fenntartható MM és BP agaron tulajdonságainak fenntartása mellett. Az AL, A1 és A2 törzsek néhány további jellemző tulajdonságait az 1. táblázat foglalja össze. 1. Táblázat: A Bacillus megaterium törzsek tulajdonságai. tesztek AL törzsek Al A2 urcáz-reakció 20.4.1.* +---+ indol-reakció 20.3.3. — — — ELS képzés 20.5.3./a — — — cifrát felhasználás (Simmons-f. táptalaj) — — + oxidáz-reakció 20.5.1. + — + kataláz-reakció 20.5.2. + — + oxi dációs-f ermentációs táptalaj (glükóz) 20.2.4. oxidativ savképzés fermentativ savképzés + + — szacharóz bontás (Russel táptalaj) 20.1.1. — + — hemolízis véres agaron — — — mikroaerob növekedés + — + növekedés eozin-metilénkék agaron 18.3.20. — — — antibiotikum érzékenység : Superseptyl R R + Nalidixsav + + + penicillin + + + Oxacillin + + + Streptomycin R + R Lincomycin + R + Polimixin—B + R + A nyálkaanyag jellemzése A1 mutáns nyálkaanyaga. A termelt nyálka mennyisége függ az MM agar szacharóz koncentrádójától: MM agar szacharóz relatív termelt konc.-ja nyálkamennyiség* (súly %) 50 nincs sejtszaporodás ill. nyálka 25 70 12,5 100 6,25 95 5,00 90 3,12 85 1,56 60 0,78 50 x3 mérés átlaga alapján, variációs koefficiens *= 5 %. 6 napos, 30 °C-on inkubált tenyészetek. Egy Petri-csészében, 79 cm'2-nyi felületen MM 25 (+5 (l o szacharóz) agaron teljes nyálkával való fedettség esetén 15—20 g nyálka termelődik 6 napos, 30 °C-on való inkubálás során. A nyálka szárazanyag tartalmának meghatározása. MM agaron (5 0 o szacharóz) termelt (6 nap, 30 30 cC) nyálkát 105 °C-on 2 óráig szárítottuk és a súlycsökkenést mértük. 5 nyálkaminta mérése alapján a nyálka szárazanyag tartalma a nyálka összsúlyának 16,2 %-a (szórás +1,2). Ez az érték a nyálkában levő baktérium szárazanyag súlyát is 35 magában foglalja, ennek értéke azonban elhanyagolható (< 1 °'o). Az A1 tenyészet nyálkaanyagának viszkozitása és nyálkatömeg/sejtszám aránya a tenyésztés során nem változik. 40 Az A2 tenyészet nyálkatermelése ezzel szemben a telep fejlődésének a függvénye. Az A2 nyálka az Al-nél kisebb viszkozitású, a nyálka megfolyik. A nyálkatömeg/sejtszám nem jellemző érték. 45 A nyálkaanyag kémiai jellemzése A) Kieselgél lapon, n-propanol/víz (7: 3) futtatóelegy alkalmazásával, timol-szulfonsavas előhívás- 50 sál az alábbi Rf értékű anyagok detektálhatok: * A megadott számok a Járványügyi és klinikai bakteriológia, Módszertani Útmutató, OKI, 1980 kódszámai. Az A1 és A2 törzsek a kiindulási AL aminosav auxotróf törzs prototróf mutánsai. Az A1 törzs a prototróf jelleget csak szacharóz tartalmú minimál közegben mutatja, amikor is ez a jelleg intenzív extracellurális nyálkatermeléssel társultan jelentkezik. Az A2 törzs nyálkatermelése szacharóz tartalmú minimál táptalajon a prototróf telepfejlődés egy bizonyos szakaszában jelentkezik. A1 nyálka 1. 0,45 2. 0,39 3. 0,0 A2 nyálka 1. 0,45 2. 0,0 Kontroll anyagok glükóz: 0,45 fruktóz: 0,45 dextrán: 0,0 60 Az A1 nyálkában a 2. anyag/1. anyag koncentráció aránya kb. 1/20. B) Cellulóz lapon n-butanol/ecetsav/víz (60 : 20 : 20) eleggyel kromatográfáivá, timol-szulfonsavas 65 előhívással az alábbi anyagok detektálhatok: 4
