184481. lajstromszámú szabadalom • Eljárás étvágycsökkentő hatású tripeptidek előállítására
1 184 481 2 A találmány tárgya eljárás az (I) általános képletü új étvágycsökkentő hatású tripeptidek X-Y-Pro-OH (I) — e képletben X L-piroglutamil-, L - 2 - keto - imidazolidin - 4 5- karbonil - vagy L - tiazolidin - 4 - karbonil - csoportot és Y glicil-, L-alanil-, L-valil-, L-leucil-, L-izoleucil-, L-prolil-, L-norleucil-, L-norvalil-, L-fenil-alanil-, L-triptofanil, L-tirozil-, L-szeril-, L- 10 treonil-, L-metionil-, L-glulamil-, L-lizil-, L- arginil-, L-2-amino-butiril-, L-2-amino-dekanoil- vagy L-ciklohexil-alanil-csoportot képvisel azzal a megszorítással, hogy ha X L-piroglutamil-csoport, akkor Y jelentése L-arginil-, L-triptofanil-, L-tirozi! és L-glicil-csoporttól eltérő — valamint az e vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítményeknek az előállítására. Reichelt és munkatársainak [Neuroscience 3, 1207 (1978)] anorexia nervosa-ban szenvedő betegek vizeletéből sikerüli a Glp-His-Gly-OH tripeptidet izolálniuk, mely állatkísérletekben anorexiás hatásúnak bizonyult. E felismerés további támpontot szolgáltatott azon elképzeléshez, miszerint az éhségérzet, illetve teltségérzet kialakulásának eddig nem ismert mechanizmusában bizonyos peptidek jelentős szerepet játszhatnak. Figyelembevéve a 3q fenti tripeptid szerkezeti hasonlóságát a TRH-hoz (thyrotropin-releasing hormone) (Glp-His-Pro- NH2) elképzelhető, hogy mindkettő azonos prekurzor molekulából keletkezik. Azt találtuk, hogy az anorexiás hatáshoz a C- 35 terminális szabad karboxil-csoport szükséges, mert e helyen karboxamidcsoportot tartalmazó vegyületek anorexiás hatást nem mutattak. Ugyancsak kiderült, hogy az anorexiás hatás eléréséhez nem szükséges a központi hisztidin jelenléte. A legjobb 40 hatást azok a vegyületek mutatták, ahol a központi aminosav alifás oldalláncú, míg a C-terminális aminosav szabad karboxilcsoportot tartalmazó prolin. A találmány értelmében a fenti meghatározásnak megfelelő X-Y-Pro-OH (I) általános képletű vegyületeket bármely, a peptidkémiában használatos módszerrel, például a 168 431. számú magyar szabadalmi leírásban ismertetett eljárás alkalmazásával állíthatjuk elő. Célszerűen oly módon járunk el, hogy prolinhoz vagy annak valamely, a karboxilcsoporton védett származékához, a peptidkémiában szokásos kapcsolási módszerekkel az X és Y aminosavakat, illetőleg azok védett származékait kapcsoljuk és a védett alakban kapott tripeptidről a védőcsoportokat ismert módon lehasitjuk. A találmány szerinti eljárás egyik előnyös kiviteli módja szerint prolin-metilésztert a terc-butiloxikarbonil-Y-OH védett aminosavval acilezünk, a kapott dipeptid-metilésztert dioxános nátrium-hidroxid-oldattal elszappanosítjuk és a terc-butiloxikarbonil-csoporlot sósavas elil-acetátos kezeléssel távolítjuk el. Az így kapott Y-Pro-OH.HCI dipeptidsót ezután benziloxikarbonil-piroglutaminsavpentafluorfenilészterrel acilezzük és a védett tripeplidről a benzijoxikarbonil-csoportot katalitikus hidrogenoiizisse! távolítjuk el. Az (I) általános képletű vegyületeket önmagukban ismert módszerekkel, célszerűen oszlopkromalográfiás módszerrel vagy egyszerű átcsapással tisztítjuk. Ennek során a vegyületeket vagy liofilezeít porok, vagy szilárd porok formájában kapjuk, melyek alkalmasak különböző gyógyszerkiszerelési formák előállítására. Az (I) általános képletű vegyületek anorexiás hatásának mérését patkányokon végeztük oly módon, hogy a 96 órán át éheztelett állatok intracerebrovenlrikulárisan (icv.) beadott fiziológiás konyhasó oldat (kontroll), illetve a vizsgálandó anyagok után egy, illetve öt óra múlva mértük a kísérleti állatok táplálékfelvételét. Az i. táblázat az (I) általános képletű vegyületek néhány reprezentánsának, a TRH-nak, valamint a Glp-His-Gly- OH tripeptidnek az adatait tartalmazza. 1. táblázat Adag (úg) Táplálék adása az inj. beadása után (h) Adagolás módja 24 óra alatt fogyasztott táplálék (g) 96 órán át éhező patkányon Kontrol] _ 5 icv. 22,16 ±0,88 Glp-His-Pro-NH2 300 1 icv. 19,81 ±1,52 300 5 icv. 17,88 ±2,94 Glp-His-Gly-OH 300 1 icv. 19,33 ±1,08 300 5 icv. 18,38 ± 1,80 Glp-Leu-Pro-OH 300 1 icv. 6,10± 1,99 300 5 icv. 9,23 ±0,92 Glp-Abu-Pro-OH 300 5 icv. 8,3 i± 1,50 2
