184390. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-[(4-hidroxi-5-pirimidinil)-ureido]-(2,3-dihidro-2-imino-4-tiazolil)-acetamido-3-metil-cef-3-ém-4-karbonsav-származékok előállítására
1 184 390 2 27. 7j3-(Da-t(2-p-hidroxi-benzil-amino)-4-hidroxi-5- pirimidinil)-ureido]-(2,3-dihidro-2-imino-4-tiazolil)acetamido}-3-[(l-metil-tetrazol-5-il)-tiometil]-cef-3-emkarbonsav-nátriumsó, 28. 7/3-{L-a-[(2-p-hidroxi-benzil-amino)-4-hidroxi-5- pirimidinil)-ureido]-(2,3-dihidro-2-imino-4-tiazoliI)acetamido}-3-[(l-metil-tetrazol-5-il)-tiometil]-cef-3-emkarbonsav-nátriumsó. A találmány szerinti /3-laktám-antibiotikumok hatásosságát például a következő vizsgálatokkal mutathatjuk ki. In vitro kísérletek A vizsgálatokat mikrotiter-rendszert használva, a sorozatos hígítás módszerével végezzük. A vegyületeknek baktérium-fejlődést gátló hatasat lolyekkony táptalajban vizsgáltuk. A baktériumfejlődést gátló hatást a következő koncentrációkban vizsgáltuk: 128; 64; 32; 16; 8; 4; 2; 1; 0,5; 0,25; 0,12; 0,06; 0,03; 0,015 jíg/rnl. A következő összetételű táptalajt használtuk: 10 g pepton, 8 g marhahús-kivonat, 3 g nátrium-klorid, 2 g dinátrium-hidrogén-foszíát desztillált vízzel 100 ml-re feltöltve; a pH értéke 7,2—7,4. Az elsődleges tenyésztés időtartama körülbelül 20 óra volt. A sejtszuszpenzió koncentrációját Eppendorf-féle fotométeren (14 mm kémcsőátmérő, 546 nm) bárium-szulfát szuszpenzió zavarosságával összehasonlítva állítottuk be. Az összehasonlító szuszpenziót 97 ml, 1%-os,kénsavhoz 3,0 ml 1%-os bárium-klorid oldat hozzáadásával állítottuk elő. A beállítás után a vizsgálandó sejtszuszpenziót 1:1500 arányban nátrium-klorid oldattal tovább hígítottuk. A mindenkkori vizsgálandó anyag 16 mg-ját 10 ml-es mérőlombikokba bemértük, és az oldószerrel jelig feltöltöttük. A további hígítás sorozatot desztillált vízzel vagy a mindenkori oldószerrel készítettük. A mikroliterlemezek mélyedéseibe 0,2 ml táptalajt. 0.01 ml megfelelően hígított vegyületet és egy csepp (0,01 ml) sejtszuszpenziót vittünk be, és 18—20 óra hosszat 37 C-on inkubáltuk. Kontrollként oldószert is inkubáltunk. Legkisebb koncentráció (ug/ml) Vegyület St. aujele reus SG 511 E. coli ATCC 11775 Pseud. A erű Hbg. Pseud. Aeru Walter Kleb s. pneum. ATCC 10031 Cefuroxim I 8 >128 >128 2 Cefa- ___ zolin 0,06 4 > 28 >128 1 A 1 0,03 32 32 0,03 B 1 0,06 32 32 0,12 C 2 0,06 32 32 0,25 D 2 0,06 16 16 0,06 E 0,5 . 0,03 16 8 0,06 F 1 0,06. 16 16 0,12. G 0,5 0,03 16 8 9,06 A leolvasásokat makroszkóposán végeztük, meghatározva a mindenkori koncentrációt (a baktériumfejlődést gádó legkisebb koncentráció). A következő mikroorganizmusokat használtuk: 5 Staphylococcus aureus SG 511, Escherichia coli ATCC 11 775, Pseudomonas aeruginosa Hamburgiensis, Pseudomonas aeruginosa Walter, Serratia marcescens ATCC 13 880, Klebsiella pneumoniae ATCC 10 031 és BC 6, Proteus mirabilis BC 17, Proteus rettgeri BC 7, Enterobacter 10 cloacae ATCC 13 047, Escherichia coli R+TEM (ßlaktamáz termelő), Klebsiella pneumoniae 1082 E (ßlaktamáz termelő). Az I. táblázatban a találmány szerinti vegyületek típusos képviselőinél meghatározott legkisebb gátló koncentráció- 15 kát (LGK) foglaltuk össze. Az I általános képletű vegyületeknek az alábbi jelentésű R, D és Y szimbólumokat tartalmazó nátriumsóit vizsgáltuk: 20 R D Y A vegyület jele 25 ciklopropil-1-metil-tetrazol-5-il-tio-H A propil-amino-1-metil-tetrazol-5-il-tio-H B hidroxi-propil-1-metil-tetrazol-H C 30-amin o-5-il-tio p-hidroxi-ciklo-1-metil-tetrazol-H D hexll-amino-5-il-tiop-amino-szulfonilmetoxi-karbonil-H E 35-fenil-amino-p-amlno-szulfonil-1-metil-tetiazol-H F-fenil-amino-5-il-tio-40 p-hidroxi-benzil-1-metil-tetrazol-H G-amino-5-il-tio-Összehasonlító vegyületként Cerufomix és Cephazolin elnevezésű, két ismert, jó hatású cefàlosporint alkalmáztunk. Klebs. Prot. ProL Enterob. E. coli Serr. Klebs. pneum. mii. rettg. cloacae R-TEM marcesc. pneum. BC 6 BC 17 BC 17 ATCC ATCC 1082 E 13047 13880 4 0,5 2 32 4 8-2 4 >128 >128 4 >128 >128 0,06 0,03 0,12 0,5 0,5 0,25. 32 0,06 0,06 0,12 0,25 0,5 0,25 16 0,12 0,06 0,25 0,5 1 0,25 32 0,06 0,12 0,12 0,25 1 0,25 32 0,06 0,12 0,12 0,25 1 0,12 32 0,12 0,25 0,25 0,5 2 0,5 64 0,03 0,03 0,06 0,12. 0,5 0,12 16 6
