184324. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fermentlé szubsztrátum-koncentrációjának növelésére szteránvázas vegyületek mikrobiológiai átalakításánál
0,1 % kálium-dihidrogén-foszfát 1,0 % nyomelem oldat pH = 6,5-7,0 sterilezés előtt. 121 9C-on 25 percig sterilezzük. Nyomelem oldat: 0,1 % kálcium-klorid 0,001 % kobalt(H)-nitrát 0,0088 % cink-szulfát 0.00039 % réz(Il)-szulfát 0,0001 % nikkel-szulfát 0,00008 % nátrium-tetraborát 0,000072 % mangán(II)-klorid 0,000037 % ammónium-foszfor-molibdenát 0,0001 % vas(II)-szulfát Az oldatot desztillált vízzel készítjük. Egy napig 37 °C-on végzett rázatás után a tenyészethez 1 ml acetonban oldott 10 mg hidrokortizont adunk, s ezzel 2 óráig rázatva indukáljuk a tenyészetet. Ezután a tenyészet 5-5 mi ét 95-95 ml steril vízzel hígítjuk, és az 1 -es lombikhoz 150 mg hidrokortizont 2 ml 10 % kalcium-klorid tartalmú metanolban oldva, a 2-es lombikhoz 1,5 g O2 jelzésű anyagot adagolunk, és a lombikokat 37 °C-on 40 órán át tovább rázatjuk. Az etilacetátos extraktumokból preparatív vékonyréteg-kromatográfiás szétválasztás után (futtató rendszer: etauol - kloroform 4:96 elegye) az 1 -es lombik esetén 72 mg, a 2-es lombik esetén 110 mg prednizolont nyerünk. Oj jélzésű anyag előállítása 0,1 kg hidrokortizont 6,6 liter 96 %-os etanolban oldunk, majd az alkoholos oldatot DIOSNA P-25 típusú keverő granuláló készülékben (gyártja: Dieckers & Löwe, Osnabrück, Német Szövetségi Köztársaság),40-45 °C-on végrehajtott szárítással egybekötve, 0,9 kg Aerosil-200 jelzésű kolloid szilícium-dioxid felületén egyenletesen eloszlatjuk. Az alkoholos oldat utolsó részletének felvitele után az anyagot 1-2 percig keverjük, majd 40-45 °C-on az oldószer elpárologtatásáig szárítjuk. 4. példa Curvularia lunata (MNG 80) csőszuszpenzióval oltott A jelű táptalajon 25 °C-on nőtt, rázott inokulum tenyészettel oltunk U jelű táptalajt tartalmazó fermentációs rázott lombikokat. A jelű táptalaj: 2,0% mogyoróliszt 2,0% glükóz pH = 6,0 sterilezés előtt. Sterilezés 121 °C-on 45 percig. A táptalajhoz a glükózt 50 %-os oldatban külön sterilezzük 121 °C-on, 25 percig. 1,6 % szójaliszt 0,04 % élesztőkivonat (szárazanyag) 0,5 % kálium-dihidrogén-foszfát 2,0% glükóz pH = 6,0 sterilezés előtt. A táptalajhoz a glükózt 50 %-os oldatban külön sterilezzük 121 °C-on, 25 percig. Két napig 25 DC-on végzett rázatás után az 1 -es lombikhoz 2 ml dimetil-szulfoxidban oldott 150 mg 17a,21- -dihidroxi4-pregnén-3,20-dion-t, a 2-es lombikhoz 1,5 g 03 jelzésű anyagot adagolunk, és a lombikokat tovább rázatjuk 2 napig. Az etilacetátos extraktumokban kvantitatív vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel (futtató rendszer: etanol-kloroform 4:96 elegye) az 1 -es lombikban 45 %, a 2-es lombikban 54 % hidrokortizon képződést mértünk. 03 jelzésű anyag előállítása 0,1 kg 17a,21-dihidroxi-4-pregnén-3,20-dion-t 1 liter kloroformban oldunk, majd a kloroformos oldatot DIOSNA P-25 típusú keverő-granuláló készülékben 35-40 °C-on végrehajtott szárítással egybekötve, 0,9 kg Aerosil-200 jelzésű kolloid szilícium-dioxid felületén egyenletesen eloszlatjuk. A kloroformos oldat utolsó részletének felvitele után az anyagot 1 -2 percig keverjük. majd 35-40 °C-on, az oldószer elpárologtatásáig szárítjuk. 5. példa Mindenben a 4, példa szerint járunk el, de az 1 -es lombikhoz 2 ml dimetil-szulfoxidban oldott 150 mg 17a,21-dihidroxi4-pregnén-3,20-dion-17-acetátot, a 2-es lombikhoz 1,5 g 0.t jelzésű anyagot adagolunk. A keletkező hidrokortizon mennyisége az 1 -es lombikban 97 mg, a 2-es lombikban 108 mg. 04 jelzésű anyag előállítása 0,5 kg 17a,21 -dihidroxi-4-pregnén-3,20-dion-17-acetátot 7,5 liter kloroformban oldunk, majd a kloroformos oldatot LÖD1GE FM-50 típusú keverő-granuláló készülékben 4,5 kg Aerosil-200 jelzésű kolloid szilícium-dioxid felületén - keverés közben — egyenletesen eloszlatjuk. A kloroformos oldat felvitele után az anyagot 1-2 percig keverjük, majd 35-40 °C-on, az oldószer elpárologtatásáig szárítjuk. B jelű táptalaj: 6. példa Absidia orchidis (MNG 13) csőszuszpenzióval oltott O jelű táptalajon 25 °C-on nőtt, rázott inokulum tenyészettel oltunk ugyancsak O jelű táptalajt tartalmazó fermentációs rázott lombikokat. Ojeiű táptalaj: 2 % malátakivonat 1 % pepton pH = 5,5 sterilezés előtt. 121 °C-on sterilezzük 25 percig. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
