184256. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorellenes hatású antibiotikum komplexek előállítására
1 184 256 2 Anyagok Rf (S—123») Azonosítás NPS-1 0,72 0-hidroxi-N-metü-valin (HM-Val) NPS-2 0,49 glicin (Gly) NPS-3 0,46 szerin (Ser) NPS-4 0,45 szarkozin (Sár) NPS-5 0,23 (nincs azonosítva) •vékonyréteg-kromatográfia, szilikagél-lemez S—123: 10% ammónium-acetát-metanol-10 ammóniaoldat 9:10:1 aiányú elegye. A fent említett öt ultraibolya elnyelő fragmensnek következő a szerkezete : az I képletű fragmens összegképlete: C14H14N206, molekulasúlya:-m/e 306 (Nf); 227, 233, 251, 343 nm; 15 a II képletű fragmens összegképlete C2 0H2 5 N3 Og, molekulasúlya: m/e 377 (M*-—58); XM^H-229, 234, 261,345 nm; a III képletű fragmens 20 XM|0H: 230, 235, 262, 345 nm; a IV képletű fragmens összegképlete Ci 0H7NO4, molekulasúlya: m/e 205 (NT); 228, 260, 354 nm; 25 az V képletű fragmens összegképlete C23H30N4O9, XM«C>h:230, 235,262, 345 nm. 6 normál sósavval végzett savas hidrolízis hatására az I, II, III és V képletű töredékekből a következő bőm- 30 lástermékek keletkeznek: Fragmens A hidrolízis körülményei bombacsó' reflux I 1106C, 20óra IV, Ser 110°C, 3 óra 35 II IV, Ser, HM-Val I, HM-Val III IVVI, HM-Val, Ser Ser: szerin 40 HM-Val: (3-hidroxi-N-metil-valin Sár: szarkozin. Ha a BBM-928 A vagy a BBM-928 C komponenst 0,1 normál nátrium-hidroxiddal 25 °C-on 3 órán át lúgosán hidrolizáljuk, a (VI) képletű fragmenst kapjuk (a Ser, HM-Val és Sár rövidítéseket a fentiekben magyaráztuk, a Gly glicint jelent, az X meghatározatlan részt). Ha a (VI) képletű fragmenst 0,1 normál sósavval kezeljük 110°C-on egy órán át, a (VII) képletű fragmenst és HM-Val-t kapunk. Ha a (VI) képletű fragmenst 0,1 normál nátrium-hidroxiddal kezeljük 37 °C-on 40 órán át, a (VII) képletű fragmenst és az I képletű fragmenst kapjuk. Ha a (VII) képletű fragmenst 0,1 normál nátrium-hidroxiddal kezeljük 37 °C-on .40 órán át, a (IX) képletű fragmenst és az (I) képletű fragmenst kapjuk. Az azonosítatlan rész (X) összegképlete C5HsN202 (peptid alakban), a (IX) törmelék és más, az (X)-et tartalmazó peptid fragmensek mikroanalízise, valamint az alábbiakban összegzett spektrumanalízis alapján. C13 -NMR Proton-NMR Csoport 30,14 (triplett) 2,36 ppm (2H, m) 61,4 (dublett) 4,2-4,5 (2H, m) 61,7 (dublett) 140,7 (dublett) 6,76 (1H, t) 171 (szingulett) -2X -CHs (Ovagy N) -CH=N-CO- (amid) -OH NH Gram-negatív baktériumok és gombák ellen. Meghatároztuk az egyes BBM-928 komponensek profág indukciós aktivitását (ILB) lizogén baktériumban. 100 Mg/ml koncentrációig nem figyeltünk meg lényeges ILB aktivitást a BBM-928 A, B és C komponensekkel. A mitomicin-C és a BBM-928 A, B, C és D komponensek összehasonlító rákellenes hatásvizsgálatát intraperitoneálisan bevitt tumorokon végeztük, a következőkön: P388 leukémia, L1210 leukémia, B16 melanóma, Lewis-Lung (LL) karcinóma és szarkóma 180 aszkitesz (S 180). A BBM-928 komponenseket 0,9% sót és 10% dimetil-szulfoxidot tartalmazó oldatokban, a mitomicin-C-t 0,9% sót tartalmazó oldatban adtuk naponta egyszer az egyszer egynapi kezeléstől a napi többszöri kezelésig terjedő adagolási program alapján. Változtatva A BBM-928 komponensek in vitro mikrobaellenes 5. táblázat aktivitása aerob baktériumok ellen Kód Vizsgált organizmus BBM-928 komponensek (MIC Mg/ml-ben) A B C D E F Sa-1 S. aureus 209P 12,5 25 50 100 100 25 Sp-1 S. pyogenes S-23 6,3 12,5 25 50 50 12,5 Sl-1 S. lutea PCI 1001 6,3 12,5 50 50 50 25 Mf-1 M. flavus D12 12,5 25 50 100 100 25 Cr-1 C. xerosis 53K-1 25 50 100 100 100 50 Bs—1 B. subtilis PCI 219 25 25 100 100 100 25 Bg-1 B. megaterium D2 25 25 50 100 100 25 Ba-3 B. anthracis A9504 6,3 12,5 25 50 50 12,5 M6-1 M. smegmatis 607 D87 25 25 25 100 100 25 Mp-1 M. phlei D88 12,5 12.5 12,5 50 50 12,5 Ec-1 E. coli NIHJ >100 >100 >100 >100 >100 >100 Kp-1 K. pneumoniae D-11 >100 >100 >100 >100 >100 >100 Pa-3 P. aeruginosa A9930 >100 >100 >100 >100 >100 >100 Pv-1 P. vulgaris A9436 >100 >100 >100 >100 >100 >100 Pm-1 P. mirabilis A9554 >100 >100 >100 >100 >100 >100 Pg-1 P. morganii A9553 >100 >100 >100 >100 >100 >100 Sm-1 S. marcescens A20019 >100 >100 >100 >100 >100 i-100 Al-1 A. faecalis ATCC 8750 >100 >100 >100 >100 >100 >100 Ca-1 C. arbicans IÁM 4888 >100 >100 >100 >100 >100 >100 Cn-3 G neoformans >100 >100 >100 >100 >100 >100 5
