184229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunszabályozó hatású polimervegyületek előállítására
1 184 229 2 Az ammóniázott etilén-citrakonsav-anhidrid kopolimer imidet tartalmazó származékát hím Fisher patkányokon BLCa tumoron vizsgáljuk túlélésre, a tumor újramegjelenésére és anti-metastázisos tulajdonságra a 13. és 15. példában megadottak szerint. A kísérletek 5 eredményeit a 18. táblázatban foglaljuk össze. A példában ismertetjük az igen alacsony molekulasúlyú etilén-maleinsav-anhidrid kopolimer előállítását oldószer—nem oldószer frakcionálással. Az eljárás során az 1. példában megadott etilén-maleinsav-anhidridet használjuk. Nyolc különböző etilén-maleinsav-anhidrid 15 készítményből 1284 g keveréket készítünk ( a keverék súlya 80 C hőmérsékleten, egy éjszakán át csökkentett nyomású térben való szárítás utáni súlyt képvisel). Ennek a nyolc etilén-maleinsav-anhidrid terméknek a specifikus viszkozitása (1%-os dimetil-formamidos ol- 20 dat, 25 °C hőmérséklet) 0,051 és 0,058 között változik (átlag 0,053) és ekvivalencia súlyuk 134 és 142 között változik az oldószerrel való frakcionálás előtt. A nyolc különböző terméket (160 g) 500 ml acetonban oldjuk, és 2,5 1 toluolban kicsapjuk, 10 perc alatt, Lightning 25 keverővei való erőteljes keverés közben. A kicsapott etilén-maleinsav-anhidrid kopolimert szűrjük, a szűrleteket a későbbiekben az oldódó polimer előállítására még felhasználjuk. A szűrési maradékot 2 1 toluolban szuszpendáljuk, majd két alkalommal 2 liter hexánban, 30 végül szűrjük, és 50 °C hőmérsékleten, egy éjszakán át csökkentett nyomású térben szárítjuk. Ily módon a nyolc különböző kísérletből származó anyagból 1143 g terméket kapunk, amely oldószerben nem oldódó etilénmaleinsav-anhidrid kopolimer és átlagos specifikus visz- 35 kozitása 0,057 (a nyolc oldószerrel kicsapott különböző kísérleti anyag specifikus viszkozitása 0,053 és 0,060 között változott). Az aceton és toluol elegyében oldódó polimert az egyesített primer anyalúgból úgy különítjük el, hogy az 40 anyalúgot töményítjük olajos desztillációs maradékig (Rotavap, forró vízfürdő, 25-30 Hgmm nyomás). A desztillációs maradékot 200 ml acetonban oldjuk, és 1 liter toluolból szobahőmérsékleten kicsapjuk. Ily módon olajos szilárd terméket kapunk. A felülúszót dekantáljuk, és a csapadékot 200 ml acetonban újra feloldjuk, majd ezt követően 1,2 liter 0 °C hőmérsékletű xilolból kicsapjuk, amiután fehér színű, szilárd halmazállapotú anyagot kapunk. A terméket szűréssel elkülönítjük, két alkalommal 400 ml xilollal, majd ezt követően két alkalommal 300 ml hexánnal mossuk, 50 °C hőmérsékleten egy éjszakán át csökkentett nyomású térben szárítjuk. Ily módon 59 g, 1%-os dimetil-formamidos oldatban és 25 °C hőmérsékleten 0,031 specifikus viszkozitású terméket kapunk, amely 342 molekulasúlyú anyagnak és a titrálás szerint 172,0 ekvivalencia súlyú terméknek felel meg. Az így kapott termék százalékos széntartalma 60,92, 60,61; százalékos hidrogéntartalma pedig 6,03, 6,12. 5 g fenti, 0,031 specifikus viszkozitású és 172 ekvivalencia súlyú etilén-maleinsav-anhidrid frakciót félamid-félkarboxíl-ammónium sójává alakítunk a 2a. példában megadottak szerint, amiután 50 °C hőmérsékleten csökkentett nyomású térben való szárítást követően 5,4 g terméket kapunk. 5 g ilyen félamid-félkarboxil-ammóniumsót a 3. példában megadottak szerint részleges imiddé alakítunk oly módon, hogy xilolban egy órán át visszacsepegő hűtő alatt forraljuk. A száraz végtermék (50 °C-on, csökkentett nyomású térben való szárítást követően) súlya 3,8g. Ezt 70 g 4,87 pH-jú vízben oldjuk, az oldat pH-ját ammónium-hidroxiddal 9,4-re állítjuk be, 0,2 mikron lyukméretű szűrön szűrjük az oldatot, majd ezt követően fagyasztva szárítjuk. A végső liofilizált termék 2,0%-os vizes oldatának pH-ja 5,1. A teljes nitrogéntartalom 12,27% és az imid-tartalom 25,0%. A fentiek szerint előállított terméket Fisher 344 patkányban FBCa tumoron vizsgáljuk, annak megállapítására, hogy milyen hatása van a túlélésre, a tumor újramegjelenésére és a tumor műtéti eltávolítását követő anti-metastázisra. A vizsgálatokat a 13. és a 15. példa szerint végeztük. Megvizsgáltuk a fenti terméket az immunválasz stimulánsára is, oly módon, hogy megállapítottuk a birka vörösvérsejtekkel (antigén) szembeni IgM antitest képzés stimulálását a 20. példában megadottak szerint. A kísérlet eredményeit a 20. táblázatban adjuk meg. 18. táblázat n Újramegjelenés Elpusztul Metastázis a halálkor Túlélők száma a 16. héten Kontrollok 10 10/10 10/10 (újra 10/10 (újra 0 18—50 nap megjelenik) megjelenik) Átlag: 48—67 nap 32,7 nap Átlag: 59 nap Vizsgálat* ** 4/9 4/4 (újra 0/4 (újra 5 19-39 nap megjelenik) megjelenik) Átlag: 61—78 nap 30 nap Átlag: 70,5 nap * 30 mg/testsúlykilogramm, egy dózis, intraperitoneálisan adagolva a tumor műtéti eltávolításának napján. A tumort a tumor beültetését követő 10. napon távolítjuk el. ** Egy állat elpusztult a tumor műtéti eltávolításakor, n: Az állatok száma. 25
