183765. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kacsa-hepatitisz elleni liofilizált vakcina előállítására
1 183 765 2 3. példa Az immunállapot kimutatása Megfelelő virulens vírus hiányában az immunállapotot vérsavóval végzett vírusközömbösítési próba segítségével értékeltük. A kísérleti 480 db naposkacsa olyan gazdaságból származott, amely export-érdekei miatt nem immunizálja törzsállományát. Egy csoport 20 kísérleti állapotból állt. Vakcinálási kísérleteinkben az alábbi összetételű puffert alkalmaztuk a hígításhoz: NaCl 8 g KCl 0,2 g Na2HP04 • 2H20 1,15 g KH2P04 0,2 g CaCl2 0,1 g MgCl2 . 6H20 0,1 g desztillált víz ad 1 000,0 ml Az 1. példa szerint előállított vakcinából a fenti összetételű pufferrel különböző hígításokat készítünk, és ezekkel mind bőr alá oltva, mind itatás útján végeztünk immunizálási kísérleteket. Összehasonlítás céljából hagyományos folyékony vakcinával is kísérleteztünk. Az immunizálás után 12 nappal vérmintákat vettünk, a savót 56 °C-on 30 percig inaktíváltuk, és az ellenanyagszintet a vírushígításos módszerrel határoztuk meg. A savó 1:10 arányú hígítását összehoztuk az egyes vírushígításokkal, és az így készített elegyeket 1 órán át szobahőmérsékleten állni hagytuk, majd 11 napos embrionált SPF tojásokba oltottuk. A vírustitert, illetve a közömbösítési indexet (Nl-t) egy hét elteltével az elpusztult, illetve még élő, de jellegzetes kórbonctani elváltozást mutató embriók száma alapján a Reed-Muench módszerrel* állapítottuk meg. Az eredményeket az alábbi táblázatban adjuk meg. Kontrolihoz A kezelés módja Dózis EID50 Beadás módja NI viszonyított különbség %-ban kontroll Fagyasztott folyékony — — 1,6 — vakcina 50 se 2 25 613 se 3 87,5 Találmány szerinti liofili-6130 se 3,6 125 zált vakcina 158 se 2,6 62,5 1585 se 4,6 187,5 Találmány szerinti liofili-15850 se 4,8 200 zált vakcina 3160 itatás 3,7 131 31600 itatás 4,4 175 316000 itatás 4,6 187,5 A 2 feletti index már pozitív, a 3 feletti igen jó eredménynek számít. A táblázatból kitűnik, hogy a találmány szerint készített vakcina védőhatása kiváló. *Orvosi Virológia, szerk. : Bakács Tibor, Farkas Elek, Medicina Kiadó 1965, 154.old. 4. példa A vakcina tárolhatóságának kimutatása A vakcina tárolhatóságát az igazi tárolás modellezésével, valamint a szokásos hőterheléssel vizsgáltuk. A tárolás modellezésénél abból indultunk ki, hogy külföldön a legtöbb vakcina előírás szerint kell, hogy +4 °C-ontárolható legyen, tehát az exportnak is szánt terméket ilyen körülmények között vizsgáltuk. A + 2 °C és + 5 °C közötti hőmérsékleten tárolt vakcina 12 hónap alatt 0,6 kitevőnyi (az EID50 hatványkitevőjéből) aktivitást veszített el, ami ne m komoly veszteség, hanem nagyságrendben a két üveg tartalma közötti szórásnak felel meg. A hőterhelési kísérlet bizonyos gyorsvizsgálatot tesz lehetővé. Ha a 3 hétig 37 °C-on tárolt vakcina titere még megfelelő, akkor biztos, hogy előírás szerint tárolva egy évig használható lesz. A találmány szerint előállított vakcina 3 hétig 37 °C-on tárolva 0,5 kitevőnyi aktivitást veszített, ami igen előnyös eredmény. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás kacsa-hepatitisz elleni liofilizált vakcina előállítására az Asplin által kitenyésztett TN jelű attenuált hepatitisz-vírus felhasználásával, azzal jellemezve, hogy az Országos Közegészségügyi Intézet Törzsgyűjteményében 00220 szám alatt letétbe helyezett vírust előkeltetett SPF tyúktojások allantoisz-üregébe juttatjuk, a tojásokat 37 °C körüli hőmérsékleten inkubáljuk, a 24. és 96. óra között elpusztult embriókat összegyűjtjük, adott esetben keményebb részeiket steril körülmények között eltávolítjuk, utána az embriókat 0,7—1,1 %-os, előnyösen fiziológiás konyhasó-oldattal homogenizáljuk, centrifugáljuk, a tiszta szuszpenzióhoz antibiotikumot adunk, és a liofilizáláshoz szokásos védő- és vázképzőany agok adagolása után önmagában ismert módon liofilizáljuk. 2. az T. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az embriók homogenizálásakor 25—35 tf% embrióból és 75—65 tf% fiziológiás konyhasó-oldatból álló szuszpenziót készítünk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy védő- és vázképzőanyagként polivinil-pirrolidon, zselatin, glükóz és szacharóz kombinációját alkalmazzuk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy liofilizáláskor a liofilizáló gép anyagtartó polcait 0 °Cés—6 °C közötti hőmérsékletre eláhűtjük, a polcokra helyezett anyagot —30 °C és —40 °C közötti hőmérsékletre lehűtjük, az anyagban lévő vizet vákuum alatt szublimáltatjuk, majd a szublimálás befejeztével a polcokat +30 °C és +40 °C közötti hőfokra fűtjük és az anyagot 4—10 órán át szárítjuk. (ábra nélkül) Megjelent a Műszaki Könyvkiadó gondozásában A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 86.0161/3 MSZH Nyomda, Budapest
