183579. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az L-arginil-L-lizil-L-aszparagil-L-valil-L-triozin pentapeptid előállítására
1 183 579 2 suk. A sósavas fázisokat egyesítés után háromszor 50 ml kloroformmal extraháljuk. Az utóbbi kloroformos fázisokat egyesítjük, és 20 ml hideg 0,1 mól/1 koncentrációjú sósavoldattal mossuk. Az összes kloroformos fázist egyesítjük, és 100 ml telített víz és nátrium-klorid-oldattal mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot 100 ml kloroform és 100 ml metanol elegyében oldjuk melegen, majd 300 ml éterrel kicsapjuk. 17,0 g (52,5%) Boc-Arg (HCl) -Lys (Boc) - -Asp(0'Bu)-Val-Tyr-OH-t kapunk. Olvadáspontja nincs, amorf anyag, R?“0,30, [a]??— —17,0° (c-=0,99, ecetsav). Anyagtartalma UV-spektrofotometriás tirozinmcghatározás alapján 101%. 6. lépés L-Arginil-L-lizil-L-aszparagil-L-valil-L-tirozin-acetát 5,0 g (5,132 nnnól) Boc-Arg(HCL)-Lys(Boc)-Asp(0‘Bu)-Val-Tyr-OH-t (5. lépés) 60 ml trifluorecetsavval kezelünk. Az oldatot 30 perc után 500 ml hideg, vízmentes éterrel meghígítjuk. A szuszpenziót 0°C-ra hűtjük, megszűrjük, a csapadékot alaposan mossuk vízmentes éterrel és exszikkátorban foszforpentoxid és nátrium-hidroxid mellett vákuumban megszárítjuk. A pentapeptid-trifluor-acetátot 100 ml vízben oldjuk, és acetátciklusba vitt Dowex 2x8 gyantával ioncseréljük. A gyantás szuszpenziót szűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, a maradékot etanollal megszilárdítjuk, majd a csapadékot kiszűrjük, és etanollal alaposan átmossuk. 3,56 gf (93,2%) Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-t kapunk monoacetát formában. Amorf anyag, R?=0,10, Rf=0, [a]r>0=28,r (c=0,99, 10%-os vizes ecetsav). Aminosavanalízis: Lys 1,02 (1), Arg 1,02 (1), Asp 1,00 (1), Val 0,99 (1), Tyr 0,83 (1). A tirozin alapján UV-spektrofotometriásan meghatározott anyagtartalom 100,2%. Nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálat szerint az anyagtartalom 99,3%. Szabadalmi igénypont Eljárás az L-arginil-L-Iizil-L-aszparagil-L-valil-L-tirozin pentapeptid előállítására oldatban történő lépésenkénti lánchosszabbítás útján, azzal jellemezve, hogy az egyes kapcsolási lépésekben az L-valin, L-aszparaginsav illetve L-lizin aminovégi védőcsoportjaként benzil-oxikarbonil-csoportot, az L-aszparaginsav /ff-karboxilcsoportjának védelmére terc-butiloxicsoportot, az L-lizin eu-aminocsoportjának, valamint az utolsó kapcsolási lépésben az L-arginin aminovégi védőcsoportjaként pedig terc-butiloxikarbonil-csoportot alkalmazunk és az aminovégi védőcsoportot az egyes kapcsolási lépések után — az utolsó lépés kivételével — katalitikus hidrogénezéssel, az utolsó kapcsolási lépés után pedig az összes jelenlevő védőcsoportot trifluorecetsavas kezeléssel távolítjuk el. 5 10 15 20 25 30 ábra nincs
