183549. lajstromszámú szabadalom • Eljárás metanobaktériumokkal végzett B-12 vitamin fermantáció fermentlevének elválasztására
1 .83 549 2 ammónium-lignoszulfonát 0,6 g (Totanin—-B) ammóniumhidrokarbonát 3 g ammóniumhidroxid 24%-os 1 ml diammóniumhidrogénfoszfát 0,2 g magnézíumklorid 0,1 g kobaltklorid 0,01 g o-xilidin 0,02 g borostyánkősav 0,006 g glicin 0,006 g 5,6-dimetilbenzimidazoi 0,006 g metanol 50,0 ml A fermentlé alapos elkeverése után a fermentort gumilappal lefedjük. A fermentlé elvételt és táptalaj betáplálást a fenti módon 24 óránkánt megismételjük. A félfolyamatos módon történő fermentáció nyolcadik napjától a fent leírt táptalajt naponta 1 g ammóniumszulfát adagolással egészítjük ki. A továbbiakban a fermentlé elvételt és a táptalaj betáplálást a fenti módon 24 óránként megismételjük. A naponta elvett fermentlében a hatóanyagtartalmat a megadott módon meghatározzuk. A fermentlé 14,5 mg/1 hatóanyagot tartalmaz. A törzsfermentor fenti módon történő félfolyamatos fenntartása mellett, a naponta elvett 1 liter fermentlevet a hatóanyagtartalom növelése céljából utófermentáljuk az alábbi módon. A naponta elvett 1’liter fermentlevet 1,5 literes üvegfermentorba töltjük és az alábbi tápanyagokat adjuk hozzá: kukoricalekvár 1 g (szárazanyagtartalom: 40%) melasz 0,2 g (szárazanyagtartalom: 50%) ipari máj extraktum 0,2 ml (szárazanyagtartalom: 20—30%) sörélesztőhidrolizátum 0,2 ml (szárazanyagtartalom : 20—30 o-xilidin 0,02 g ammónium-lignoszulfonát 0,06 g (Totanin—B) ammóniumhidrogénkarbonát 1.0 g nátrium-tripolifoszfát 0,2 g ammóniumszulfát 0,2 g magnéziumklorid 0,01 g kobaltklorid 0,003 g aceton 0,01 ml 5,6-dimetilbenzimidazol-acetát 0,02 g metanol 10,0 ml A vízoldható dimetilbenzimidazol-acetát törzsoldatot 30 g 5,6-dimetilbenzimidazol 200 ml 10%-os ecetsavban történő feloldásával állítjuk elő. A tápanyagok hozzáadása után alaposan elkeverjük, majd 32—43 °C-on lazán ledugaszolva állni hagyjuk a ferírentlevet. 24 órás korában megismételjük a fenti tápanyagok betáplálását, majd 48 órás korában a hatóanyag kinyerése céljából feldolgozzuk az 1 liter utófermentált levet. Megfelelő számú 1,5 literes utófermentorral a napi folyamatos termelés biztosítható. A 48 órás utófermentált fermentlében a hatóanyag tartalmat a megadott módon meghatározzuk. A fermentlé 25 mg/1 hatóanyagot tartalmaz. Az 1 liter utófermentált levet a hatóanyag kinyerése céljából adalékanyag hozzáadása nélkül 6000 f/p fordulatszámmal 10 percig centrifugáljuk, így 60 ml sűrítményt (biomassza) és 940 ml centrifugalevet kapunk. A 60 ml sűrítményben a hatóanyag tartalmat a megadott módon meghatározzuk. A 60 mi sűrítmény hatóanyagtartalma 21,8 mg, így a kinyerés 78% hatásfokú. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás mezofil, metántermelő vegyes mikropopulációval, szeptikus körülmények között ismert tápanyag-komponenseket és prekurzorokat tartalmazó tápoldat jelenlétében metanolbaktériumos fermentáció Bi2-vitamin tartalmú sűrítményének elválasztására, azzal jellemezve, hogy a törzsfenttartó fermentáció fermentlevének mintegy 10%-át naponta elvesszük, az elvett mintegy 10 tf/% fermentlé helyébe azonos térfogatú ismert tápanyagokat és prekurzorokat tartalmazó tápoldatot adagolunk, az elvett mintegy 10 tf/% fermentléhez ismert tápanyagokat és nátriumtripolifoszfátot, acetont és 5,6-dimetil-imidazol-acetátot tartalmazó tápoldatot adunk, majd 24—48 órás utófermentációnak vetjük alá, majd . az utófermentált fermentlevet sűrítményre és felülúszóra választjuk szét. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a sűrítmény a fermentlé hatóanyagtartalmának mintegy 80—95%-át tartalmazza. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az elválasztást szeparálással végezzük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Ábn nélkül 5
