183177. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ß-laktám- antibiotikumok előállítására
1 183 r?7 2 2. táblázat folytatása Sorszám A (CH2)nR, D E 108. p-HO-fenil-6-metilszulfonil-3-piridil-4-aminokarbonil-piridínium-109. p-HO-fenil-5 -ami n őszül f on il-2-tien ilmetil-4-aminokarbonil-piridímum-110. p-HO-fenil-6-metilszulfinil-3 piridil-4-aminokarbonil-piridínium-111. p-HO-fenil-2-metiI-5-pirimidinil-metil-4-a min oka r bonil-pi ri dini u m-112. p-HO-fenil-5-anrinokarbonil-2-tienil-OCOCH3-H 113. p-HO-fenil-5-aminokarbonil-2-tienil-1 -metil-tetrazol-5-il-tio-H 114. 2-ticnil-5-aminokarbonil-2-ticnill-mctil-lclrazol-5-il-tio-11 115. p-HO-fenil-6-hidroxi-3-piridil-OCOCH3-H 116. p-HO-fenil-6-hidroxi-3-piridill-metil-tetrazol-5-il-tio-H 117. p-HO-fenil-6-hidroxi-3-piridil-2-metil-l ,3,4-tiadiazol- 5-il-tio-H 118. p-HO-fcnil-2-hidroxi-5-pirimidinil-OCOCH3-H 119. p-HO-fenil-2-hidroxi-5-pirimidinil-1 -metil-tetrazol-5-il-tio-H 120. p-HO-fenil-2-hidroxi-5-pirimidinil-2-metil-l ,3,4-tiadiazol- 5-il-tio-H 121. 2-tienil-2-hidroxi-5-pirimidinil-1 -metil-tetrazol-5-il-tio-H 122. 2-tienil-6-hidroxi-3-piridil-1 -metii-tetrazol-5-il-tio-H 123. p-HO-fenil-2,4-dihidroxi-5-pirimidinil-l-metil-tetrazol-5-il-tio-H 124. p-HO-fenil-2,6-dihidroxi-4-pirimidinil-OCOCH3-H 125. p-HO-fenil-2,6-dihidroxi-4-pirimidinil-l-metil-tetrazol-5-il-tio-H 126. p-HO-fenil-4,6-dihidroxi-2-pirimidinil-OCOCH3-H 127. p-HO-fenil-4,ő-dihidroxi-2-pirimidinil-l-metil-tetrazol-5-il-tio-H A találmány szerinti /3-laktám-antibiotikumok hatásosságát például a következő vizsgálatokkal lehet kimutatni: 40 1. In vitro vizsgálatok Ezekben a vizsgálatokban a sorozat-hígításos mód- 45 szert nrikrotiter-rendszerben alkalmaztuk. A vegyületeknek a baktériumok fejlődését gátló hatását folyékony táptalajban vizsgáltuk. A baktériumokra gyakorolt hatást a következő koncentrációkban vizsgáltuk: 128; 64; 32; 16:8;4:2; l;0,5;0,25;0,12;0,06/Líg/ml. 50 A következő összetételű táptalajt használtuk: 10 g pepton, 8 g marhaluískivonat, 3 g nátriumklorid, 2 g szekunder nátriumfoszfát desztillált vízzel lOOml-re feltöltve (az oldat pH-ja 7,2 -7,4). Csak a streptococcusok vizsgálatánál adtunk a táptalajhoz még 1 g glukózt is. 55 Az elsődleges tenyésztés időtartama körülbelül 20 óra volt. A csíraszuszpenzió beállítását „Eppendorf” féle fotométerrel (kémcsőátmérő 14 mm, szűrő 546 mm) végeztük olyan báriumszulfát szuszpenzió zavarosságával való összehasonlítás útján, amelyet 3,0 ml, 1 %-os 60 báriumklorid-oldatnak 97 ml, 1 %-os kcnsav-oldathoz való hozzáadásával kaptunk. A beállítás után a Streptococcus Aronson szuszpenziót 1:15 arányban és a többi mikroorganizmust 1:1500 arányban nátriumklorid oldattal tovább hígítottuk. 65 A mindenkori vizsgálandó vegyület 16 mg-ját 10 ml-es mérőlombikba mértük be, és az oldószerrel jelig feltöltöttük. A további sorozat-hígításokat desztillált vízzel vagy a mindenkori oldószerrel végeztük. A mikrotiter-lemezek mélyedéseibe 0,2 ml táptalajban a megfelelően hígított vegyület 0,01 ml-ét és egy csepp (0,01 ml) baktériumszuszpenziót vittünk be, és 18-20 óra hosszat 37 °C-on inkubáltuk. Kontrollként mindig oldószert is inkubáltunk. A leolvasást makroszkóposán végeztük, és a mindenkori határkoncentrációt (a baktériumfejlődést gátló legkisebb koncentrációt) meghatároztuk. A következő mikroorganizmusokat alkalmaztuk ezekben a vizsgálatokban: Staphylococcus aureus SG 5U. Escherichia coli ATCC 1 1775, Pseudomonas aeruginosa Humbmgensis cs Pseudomonas aeruginosa Walter, Serratia marcescens ATCC 13 880, Klebsiella pneumoniae ATCC 10031 és 272, Proteus mirabilis Hamburgenris, Proteus rettgeri, Enterbacter cloaceae ATCC 13 047, Escherichia coli R + TEM (jU-laktamáz-termclő). A következő, 3. táblázatban a találmány szerinti vegyületek jellegzetes képviselőinél megállapított legkisebb gátló koncentráció értékeket (LGK) foglaljuk össze.
