183078. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens a koleszterin-észteráx aktiválására
1 183 078 2 2.4. 2 térf% ciklohexanol hozzáadása. 3.5. 0,3 térf% 2,2,2-triklór-etanol hozzáadása. Bevitt aktivitás Elért sebesség ezen sebességhez adjuváns nélkül szükséges enzimmennyiség Elért aktivitás 0,003 egység/ml 0,114 extinkció/10 perc 0,0114 egység/ml 380 %. Bevitt aktivitás Elért sebesség ezen sebességhez adjuváns nélkül szükséges enzimmennyiség Elért aktivitás 0,003 egység/ml 0,089 extinkció/10 perc 0,0144 egység/ml 480 %. 10 3. példa 5 %o Genapol OX-100/5 mólos 7,0 pH-jú kálium-foszfá Bevitt aktivitás 0,0012 egység/ml 0,0030 egység/ml 0,0060 egység/ml 0,0090 egység/ml 0,0150 egység/ml 0,0240 egység/ml 3.1. 4 mmól/liter (0,065 súly adása. %o nátrium-kaprilát 0,3 pufferban. jg Elért sebesség 0,01 extinkció/10 perc 0,023 extinkció/10 perc 0,038 extinkció/10 perc 20 0,055 extinkció/10 perc 0,093 extinkció/10 perc 0,138 extinkció/10 pe re. &) 3,4-diklór-fenol hozzáb) Nagyobb reakciósebességek elérése előre megadott feltételek mellett. Sok esetben bizonyos feltételek, így például puffer és ionerősség, valamint a detergens fajtája a reakcióelegyben fontosabb szempontok miatt már előre megadottak. Ilyen ok lehet például az elegyben jelenlevő valamilyen más enzim nagyobb érzékenysége. Ilyen esetekben az észterhasítás konstans koleszterin-észteráz hozzáadással elérhető maximális sebessége az észterázaktiválásnak a detergens fajtája és a detergenskoncentráció által való befolyásától függ, és ezek korlátozzák. Ez a függőség általában kis detergenskoncentrációknál mutat optimumot. Az ennél a pontnál elért sebesség a fent felsorolt körülmények között nem haladható meg, és ebből a szempontból a rendszer határát jelenti. A példákban alább leírt találmány szerinti kombinációk alkalmasak arra, hogy az ilyen határokat átlépjük. Bevitt aktivitás Elért sebesség ezen sebességhez , adjuváns nélkül szükséges enzimmennyiség Elért aktivitás 0,0030 egység/ml 0,058 extinkció/10 perc 30 4. példa 0,0093 egység/ml 310%. Előre megadott feltételek: 0,1 mólos 8,0 pH-jú trisz/borkősav puffer, Triton X-100, 35 0,003 egység/ml koleszterin-észteráz. 3.2. 10 mmól/liter (kb. 0,09 sűly%) fenol hozzáadása. Bevitt aktivitás Elért sebesség ezen sebességhez adjuváns nélkül szükséges enzimmennyiség Elért aktivitás 0,003 egység/ml 0,064 extinkció/10 perc 0,0104 egység/ml 347 %. 3.3. 1 térf% 4-metil-2-pentanol hozzáadása. 40 45 Bevitt aktivitás Elért sebesség ezen sebességhez adjuváns nélkül szükséges enzimmennyiség Elért aktivitás 3.4. 2 térf% ciklohexanol 0,003 egység/ml 0,080 extinkció/10 perc 50 0,0112 egység/ml 373 %. 55 hozzáadása. Bevitt aktivitás Elért sebesség ezen sebességhez adjuváns nélkül szükséges enzimmennyiség Elért aktivitás 0,003 egység/ml 0,080 extinkció/10 perc 60 0,0129 egység/ml 430 %. 65 %0 Triton X-100 az elegyben elért sebesség 0 0 extinkció/10 perc 1 0,003 ext./10 perc 3 0,028 ext./10 perc 5 0,037 ext./10 perc 7 0,037 ext./10 perc 10 0,037 ext./10 perc 15 0,029 ext./10 perc Optimum A rendszer határa 5 %o 0,037 extinkció/10 Az adjuvánsok hozzáadása 5 %0 Triton X-100-nál. 4.1. 2 térf% terc-amilalkohol hozzáadása. Elért sebesség 0,046 ext./10 perc Emelkedés 124%-ra. 4.2. 0,4 térf% 4-metil-2-pentanol hozzáadása. Elért sebesség 0,06S «Kt./10 perc Emelkedés 176%-ra. 4.3. 1 térf% ciklohexanol hozzáadása. Elért sebesség 0,077 ext./10 perc Emelkedés 208 %-ra. 5
