183040. lajstromszámú szabadalom • Készítmény cukorrépa kezelésére és eljárás a készítmény előállítására
1 183 040 2 A 199 906 és 204 208 számú szerzői tanúsítványok tárgya olyan készítmény, melyet a növekedő növényeken alkalmaznak palántaeldőlés (Wurzelbrand) betegség megelőzése céljából. Mindkét kompozíció esetén az aktív hatóanyag oospóra, a Pythium Oligandrum Drechsler mikoparazita megtermékenyített szerve. A két leírás a tenyésztő közeg kémiai összetételében és a termelés módszerében különbözik egymástól. Mindkét termék folyékony halmazállapotú és a cukorrépa magvainak nedves kezelését teszi lehetővé, melyet szárítás követ. Mindkét készítmény hasznosnak bizonyult mind konténeres, mind szabadföldi kísérletekben. A találmány tárgya cukorrépa palántaeldőlés (Wurzelbrand) betegséggel szembeni megvédésére szolgáló, Pythium Oligandrum mikoparazita oospóráit tartalmazó készítmény, amely aktív hatóanyagként a Pythium Oligandrum mikoparazita szárított, őrölt és homogenizált tenyészetét tartalmazza olyan szubsztráton, amely a tenyésztő közeggel telített szemcsés anyagból áll. A találmány szerinti készítményben előnyösen 1 ml vizes szuszpenzióban legalább 4 000 000 oospóra van. A készítményt előnyösen úgy állítjuk elő, hogy egy alumínium edényben elhelyezett szemisteril tápközeget 1,5 cm vastag sterilezett, őrölt anyagréteggel fedünk be. Ezt a réteget alkalmas folyékony tápközeggel telítjük. Az így készített szubsztrátot autoklávban vízgőzben sterilezzük 120 °C-on 30 percig. Ezután a szubsztrátot beoltjuk a Pythium oligandrum mikroparazita oospóráinak vizes szuszpenziójával a szubsztrát teljes felületére való egyenletes öntéssel vagy permetezéssel. Átlagosan 1 kg őrölt anyagra 200 ml szuszpenzió jusson (oospóra plusz sterilezett desztillált víz). A beoltott szubsztrátot 14 napig 25 °C hőmérsékleten tenyésztjük. A tenyésztést speciális tenyésztőhelyen végezzük sterilizált és klimatizált környezetben. A tenyésztés folyamán mikroszkópos vizsgálatokat kell végezni a megtermékenyülés fokára vonatkozóan. A tenyésztéssel párhuzamosan folyik a micéliumok növesztése és sterilitása. A tenyésztés befejezése után a micéliumok életképességének és a megtermékenyülés fokának biológiai vizsgálatát végezzük. A tenyésztés vége lényegében attól függ, hogy elértük-e a mikoparaziták oospórái optimális termelését. Optimálisnak tekinthetjük a 4 000 000 és 5 000 000 közötti oospóraszámot a készítmény egy grammjára vonatkoztatva. Az ismertetett stacioner tenyésztési módszer nagyon előnyös az oospórák termelésére és megfelelő menynyiségű oospóra termelését teszi lehetővé. A koncentrációt azután könnyen be lehet állítani a végső terméknek megfelelően. A következő lépés a mikoparazita-biomassza megszárítása a tenyésztő szubsztráttal együtt. A szárítást vagy liofilezéssel végezzük, vagy szalagszárító kemencében 30 és 35 °C közötti hőmérsékleten. A szárított anyagot azután megőröljük és homogenizáljuk. Ezzel áz eljárással igen finom port kapunk, amely könnyen tapad a durva felületű cukorrépamagvakhoz. A kapott termékben biológiailag ellenőrizzük a termék oospóráinak koncentrációját és életképességét. A termék oospóra-koncentrációja olyan kell legyen, hogy a kezelés után magonként 100 000 Pythium oligandrum mikoparazita oospóra legyen. Ez a koncentráció biztosítja azt, hogy a cukorrépamagvak kihajtása után a kihajtott növények gyökere a mikoparaziták rétegével van bevonva. A kihajtott cukorrépa növény gyökerének Pythium oligandrum mikoparazitákkal való borítása lehetetlenné teszi egyrészt kompetitiv körülmények kialakulása következtében, másrészt közvetlen parazitahatás következtében a másik mikroorganizmus növényre való telepedését és így a cukorrépa növény patogén károsítását, melyet palántaeldőlés (Wurzelbrand) betegségnek nevezünk. A cukorrépa palántaeldőlés elleni készítmény ■■ előállításának technológiáját a következő diagrammon szemléltetjük: —» az alumínium edény és a szubsztrát (szemcsés anyag tápközeggel) sterilezése vízgőzben autoklávban, —> a szubsztrát beoltása Pythium oligandrum mikoparazita oospóráinak vizes szuszpenziójával, -h> életképesség biológiai ellenőrzése, —* tenyésztés alumínium edényekben szemisteril vagy steril, klimatizált környezetben,--> a termelt mikoparazita micéliumok és a szubsztrát szárítása liofilezéssel vagy szalagszárító kemencében, a termék őrlése és homogcnizálása,--» a kilépő aktív szubsztrát életképességének és koncentrációjának biológiai ellenőrzése, —» a por alakú biopreparátum csomagolása, —» szállítás. A spóraképződést elő lehet segíteni oly módon, hogy a stacioner tenyésztés alatt megvilágítjuk a tenyészetet, előnyösen a spektrum látható tartományában a következő színszűrők segítségével: kék 440-490 nm, zöld 490—550 nm. A stacioner tenyésztésre alkalmas szubsztrát (szemcsés anyag, előnyösen köles) telítésére előnyösen olyan folyékony tápközegeket használhatunk, mint amelyeket a 204 208 sz. szerzői tanúsítványban ismertetnek a szubmerz tenyésztés céljaira. Ezenkívül a következő két tápközeget említhetjük: Kukoricalekvár 3 % szaccharóz 3 % kalcium-klorid 2,5 % pH 5,5--6,0 Kukoricalekvár 3 % szaccharóz 3 % kalcium-klorid 2,5 % cink-szulfát 0,05 % mangán-szulfát 0,02 % pH 5,5--6,0 A találmány szerinti eljárást az alábbi példával szemléltetjük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
