183022. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4-androsztén-3,17-dion-származékok előállítására
1 után 4.8 g foür-tluor-4-sftdrosztén-3,17-iliont kapunk amelynek olvadáspontja 228 231 °C 4. példa 2 literes Erlenmeyer lombikban levő 500 ml steril táptalajt, amely 1% élesztőextraktumot, 0,45% dinátriumhidrogénfoszfátot, 0,34% káliumdihidrogénfoszfátot és 0,2% Tween 80 emulgeátort tartalmaz, és pH- értékét 6,7-re állítottuk be, beoltunk a Mycobacterium spec. NRRL-B-3805 törzs száraz kultúrájának szuszpenziójávaf, és három napon át rázzuk 30 °C hőmérsékleten, percenként 190 fordulattal. 20 darab, Erlenmeyer lombikban levő 100-100 ml steril táptalajt, amely 2,0% kukoricalekvárt, 0,3% diammóniumhidrogénfoszfátot és 0,25% Tween 80 emulgeátort tartalmaz, és amelynek pH-értékét 6.5-re állítottuk be, beoltunk a Mycobacterium spec, tenyészkultúrájának 5 -5 ml-ével, és 24 órán át rázzuk 30 °C hőmérsékleten percenként 220 fordulattal. Ezután minden egyes kultúrához 100 mg, 5 ml dimetiíformamidban oldott 7a-metil-4-kolesztén-3-ont adunk, és további 96 órán át fermentáljuk. Az egyesített kultúrákat etilénkloriddal extraháljuk, az extraktumot vákuumban bepároljuk, és a maradékot kovasav oszlopon végzett kromatografálással tisztítjuk, így diizoproptléterhői végzett átkristályosítás után 0,8 g 7«-meti!-4-androsztén-3,17-dtont kapunk, amelynek olvadáspontja 193-194 °C. A kiindulási anyagot az alábbi módon állítjuk elő. 30 g koleszterint, 34,29 g lítiumbromidot és 34,3 g lítiumkarbonátot 525 m! dimetiíformamidban szuszpendáfunk, ezután 75-80 °C-ra (belső hőmérséklet) melegítjük, és 45 perc alatt cseppenként összekeverjük 7,95 ml bróm 170 ml dioxánnal készített elegyével. A reakcióelegyet 2 órán át keverjük, majd 3 liter vízben elkeverjük, további 30 percen át tovább keverjük, jeges hűtés közben jégecettel 4-es pH-értékig savanyítjuk, és etilacetáttal extraháljuk. Az extraktumokat félig telített nátriumklorid-oldattal semlegesre mossuk, nátriumszulfáttal szárítjuk, és az oldószert vákuumban ledesztilláljuk. így 34,4 g nyersterméket kapunk, amelyet kovasavon végzett kromatografálással tisztítunk. Ezt követően metanolból végzett kristályosítás után 25,6 g 4,6-kolesztadién-3-ont kapunk, amelynek olvadáspontja 80-82,5 °C. 7 g magnéziumforgácsból, 275 mi éterből és 6,26 ml metiljodídból a szokásos módon éteres meíilmagnéziumjodid-oldatot készítünk. A reakció befejeződése után az éter egyidejű ledesztillálásával 550 rrú abszolút tetrahidrofuránt csöpögtetünk hozzá, 58-60 °C belső hőmérséklet alatt. Erős jeges hűtés közben 1,4 g réz(I)kloridot adunk az oldathoz, majd további 15 perc múlva 30 perc alatt belecsöpögtetjük 27,5 g 4,6-kolesztadién-3-on oldatát, az elegyet 2 órán át keverjük, majd óvatosan összekeverjük 300 ml telített ammóniumklorid-oldattal, 2 liter éterrel felhígítjuk, és a szokásos módon feldolgozzuk. A nyersterméket (28,7 g) 250 ml tetrahidrofuránban feloldjuk, és 10 ml 2 n kénsav hozzáadása után 2 órán át visszafolyató hűtő alkalmazásával forraljuk. A szokásos , feldolgozás után 26,3 g nyersterméket kapunk, ezt kovasavgélen végzett kromatografálással tisztítjuk. így 16,6 g 7a-metil-4.-ko!csztén-3-ont kapunk, amelynek olvadáspontja 72 73 75 °C (pentán) i * 4 20 darab Eriemncycr lombikban 100 100 mg 6ametil-4-kolesziéu-3-on! Mycobacterium spec. NRRL-B- 3805 kultúrával fermentálunk a 4. példa szerinti módon, majd az elegyet feldolgozzuk. így 0,8 g 6a-meiil-4- androsztén-3,!7-dioní kapunk, amelynek olvadáspontja 17Í-174 °C. A kiindulási anyagot az alábbi módon állítjuk elő. 30 g koleszterint 600 ml metilénkloridban feloldunk, és jeges vízzel való hűtés közben 20 perc alatt részletekben hozzáadunk 17,4 g m-klór-perbenzoesavat. 30 perccel az adagolás befejezése után az elegyet 200 ml me írtén kloriddal felhígítjuk, 2 X 200 ml telített nátriumszulfátoldattal, 2 X 200 ml híg nátriumhidrogénkarbonát-oldattal kirázzuk, majd vízzel addig rázzuk, amíg az oldat semleges nem lesz. Ezután nátriümszulfát felett szárítjuk, majd az oldószert vákuumban ledesztilláljuk. A nyersterméket metanolból átkristályosítjuk. így 23,4 g 30-hidroxi-5,6-epoxi-koleszterint kapunk, amelynek olvadáspontja 133- 136 °C. 3,64 g magnéziumforgácsból és 9,5 ml metitjodidből 100 ml éterben metilmagnéziumjodrd-oldatot készítünk. Ezután hozzácsöpögtetünk 20 g .3ß-hidroxi-5,6-epoxtkoleszterint 400 ml abszolút toluolban, és 45 órán át keverjük 60 65 °C hőmérsékleten. Az elegyet ezután jeges hűtés közben óvatosan összekeverjük !Ö0 ml telített ammóniumklorid-oldattal, és a szokásos módon feldolgozzuk. A nyersterméket (21,3 g súlyé bamaszmű, viszkózus olajszerű anyag) 400 ml benzolban feloldjuk, és 100 ml ciklohexanon és 20 g aluminium-izopropilá t hozzáadása után 21 órán át forraljuk visszafofyaíó hűtő alkalmazásával. A lehűlt oldatot benzollal felhígítjuk, n kénsawal többször kirázzuk, és vízzel semlegesre mossuk. A nyersterméket tisztítás céljából kovasaVgélen kromatografáljuk. Metanolból végzett átkristályosítás után 12,75 g 6a-metil-4-kolesztén-3-ont kapunk, amelynek olvadáspontja 151-154 °C. B) A 4-androsz.tén-3,l 7-dion-származékok kémiai átalakítása. I. példa 3,2 g 6o-fluor-4-androsztén-3,17-diont 50 ml izopropanolban feloldunk, 0 °C-ra hűtjük, és összekeverjük 135 mg finomra elporított nátriumbórhidriddel. Az elegyet 3 órán át keverjük 0 °C hőmérsékleten, n kénsawal 5 ös pH-értékre savanyítjuk, és vákuumban teljesen bepároljuk. A maradékot metilénkloriddal extraháljuk, az extraktumot mossuk, vákuumban bepároljuk, és diizopropiléterből átkristályosítjuk. így 2,05 g 6a-fluor-4- androsztén-17jS-olt kapunk, amelynek olvadáspontja 156—158 °C. Erről a vegyületről közismert, hogy erős anabolikus hatású [Steroids, 3., 109.(1964)1. II. példa 4,6 g 7a-metil-4-androsztén-3,17-diont 20 ml metanol és 5 ml ortohangyasav-trimetilészter elegyében szuszpendálunk, és 50 mg p-toluolszulfonsav hozzáadása után 2 órán át forraljuk. 15 °C-ra való lehűtés után hozzáadunk 4 ml acetont, az elegyet 90 percen át keveijük 15 °C-on, majd hozzáadunk 0,1 ml trietilamint. A csapadékot leszűrjük, kevés metanollal mossuk, és vákuumban 20 °C-on szárítjuk. A nyersterméket 40 ml abszolút éterben feloldjuk, és szobahőmérsékleten 10 • ü 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 66
