182920. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklosoporint tartalmazó stabil gyógyszerkészítmények előállítására
1 182 920 2 E célból a kísérleti anyag beadása után szabályos időközökben vett vérszérumot összegyűjtjük, és 0,3-10%-os koncentrációban in vitro egér lépsejtszuszpenziójához adjuk, amelyben a limfocita szaporodást concavallin A-val végrehajtott 72 órás kezeléssel váltjuk ki. Ezután 3H-timidint adunk a készítményhez, és 24 óra múlva megmérjük a timidinbeépülést a limfocitaszaporodás megállapítására. Kívánt esetben a peptid radioaktív alakban adható be. Ciklosporinok esetében például a találmány szerinti gyógyszerkészítményben 100 mg 3 H-mal jelzett ciklosporin A-t (készült a Tolypocladium inflatum Gams NRRL 8044 ismert gombatörzs fermentálásával, az SCH3-csoportban triciummal jelölt metionin jelenlétében) ivóoldat alakjában vagy kapszulában orálisan vagy injekciós oldat alakjában intramuszkulárisan hím beaglekutyáknak adtunk be. Minden állattól a beadás után 15 perctől 1 óráig terjedő időben, majd a beadás után eltelt 8 óra alatt még minden órában vérmintákat vettünk, és vizeletmintákat is gyűjtöttünk. A vér és a vizelet radioaktivitásának meghatározásával kapjuk a peptidabszorpció értékeit. A találmány szerinti gyógyszerkészítményben beadandó peptid mennyisége természetesen a beadás módjától, a kívánt hatástól és a kezelési körülményektől függ. Általában a találmány szerinti gyógyszerkészítményben beadott peptid mennyisége azonos nagyságrendű a más módon beadott peptidével. Ciklosporinok esetében ismert a gyógyhatás eléréséhez szükséges mennyiség. A találmány szerinti gyógyszerkészítményeket alkalmazva, naponta 3-5 mg/kg ciklosporin adandó be krónikus gyulladások kezelésére és immunoszuppresszív hatás elérésére. A következő példák a találmány megvilágítására szolgálnak. A hőmérsékleti adatokat °C-ban adjuk meg. 1. példa Ivóoldat LABRAF1L M 1944 CS és etanol 40:15 arányú, 1 ml elegyébe 25 °C-on 200 mg ciklosporin A-t keverünk; 0,4 ml olíva- vagy kukoricaolajat adunk hozzá, és a keletkezett oldatot megszűrjük, és üvegekbe töltjük. Az oldat 10 súlyrész LABRAFIL-ra számítva 3 súlyrész ciklosporin A-t, 3 súlyrész etanolt és 5 súlyrész olíva- vagy kukoricaolajat tartalmaz. 2. példa Parenteralis készítmény intramuszkuláris és szubkután beadásra 40 mg etanol és 300 mg LABRAFIL M 1944 CS elegyébe 25 °C-on 100 mg ciklosporin A-t keverünk, és a kapott oldatot olívaolajjal 1 ml-re kiegészítjük. Az oldatot aszeptikus körülmények között ampullákba töltjük. 3. példa Parenteralis készítmény intramuszkuláris és szubkután beadásra 50 mg etanol és 300 mg LABRAFIL M 1944 CS elegyében 25 °C-on keverés közben feloldunk 200 mg ciklosporin A-t, és a kapott oldatot kukoricaolajjal 1 ml-re kiegészítjük. Aszeptikus körülmények között ampullákba töltjük. összehasonlító vizsgálatok Vizsgált készítmények I. készítmény: készül a találmány szerint. A készítményt üzemi méretben a következő mennyiségű alkotórészekből állítottuk elő. Alkotórész Mennyisége (kg) i) Labrafil M 1944 CS 150,00 ii) vízmentes etanol 50,00 iiia) ciklosporin A—1. adag 9,08 iiib) ciklosporin A—2. adag 14,23 iiic) ciklosporin A-3. adag 14,00 iiid) ciklosporin A—4. adag 13,30 iv) olívaolaj körülbelül: 212,00 összesen: 462,50 A ciklosporin A [liia)— iiid)] teljes mennyisége 50,61 kg, amelynek meghatározott teljes víztartalma 0,61 kg, így a ciklosporin A száraz mennyisége 50,0 kg. Az összes alkotórészt közvetlenül keverőedénybe mértük be. Először az i) és ii) alkotórészeket tettük az edénybe, és 5 percig kevertük. Ezután a megadott részletekben hozzáadtuk az iiia) — iiid) alkotórészt, miközben teljes oldódásig folyamatosan kevertük (körülbelül 40 perc). Ezután keverés közben 10 perc alatt hozzáadtuk az iv) alkotórészt. A kapott világossárga, olajos oldatot 0,6—0,8 bar nyomáson szűrtük (Gelman Preflow Filter 400—10 pm) és 50 ml-es Rexo-féle palackokba töltöttük (51,5 ml = 47,6 g). A palackokat gumidugóval és alumíniumsapkával lezártuk. Az összes műveletet vízmentes körülmények kozott, szobahőmérsékleten és nitrogéngáz alatt (0.25 bar) végeztük. A palackozott oldat 1 ml-re a következő összetételű. i) 300 mg/ml Labrafil M 1944 CS; ii) 100 mg/ml vízmentes etanol; iii) 100 mg/ml ciklosporin A (szárazsúly) és iv) kb. 425 mg/ml olívaolaj II- V. összehasonlító készítmény A készítményeket a következő alkotórészek megadott mennyiségből állítottuk elő. Alkotórész II Készítmény (mg/ml) III IV V i) Labrafil M 194 CS 300 500 700-737 ii) vízmentes etanol — — — 100 iii) ciklosporin A* 100 100 100 100 iv) olívaolaj — 541-346-149-* száraz súly. A II—V. készítményeket az I készítmény előállításával analóg módon készítettük, de laboratóriumi méretben és vagy a ii) alkotórészként alkalmazott etanolt (II—IV készítmény) vagy az iv) olívaolaj alkotórészt (V készítmény) hagytuk ki. A II—V készítményekben a ciklosporin A ml-enkénti mennyisége azonos volt az I készítménnyel, a végső 100 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
