182641. lajstromszámú szabadalom • Diagnosztikai eszköz a glükóz kimutatására és meghatározására
182 641 185 g/m2 négyzetmétersúlyú szűrőpapírt alkalmazunk hordozóként, és egyszerre az alábbi oldatokkal preparáljuk a leírt módon. 2 bemérési zóna, 10 mm széles 0,1 g káliumpermanganátot és 100 mg kongóvörös 100 ml desztillált vízzel készített oldatával a papír alsó szélét kezeljük 10 mm szélességben. A vizeletbenesetleg jelenlevő és a reakciót zavaró red rkáló anyagok például aszkorbinsav ebben a zónában oxidálódik. 5 közbenső zóna, 5 mm széles 1 g nitriloecetsav 100 ml desztillált vízzel készített oldatával a bemérési zónát követően 5 mm széles közbenső zónát alakítunk ki, amely jelző zónaként szolgál. 3 reakciózóna, 10 mm széles 0,5 g borostyánkősav 50 ml desztillált vízzel készített oldatát és 0,5 g ( = 15 000 E) glükózoxidáz 50 ml desztillált vízzel készített oldatát összekeverjük és azonnal az 5 közbenső zóna feletti 10 mm széles sávot impregnáljuk vele. 5 közbenső zóna, 5 mm széles 1 g nátrium-acetát 100 ml desztillált vízzel készített oldatával 5 mm széles zónát impregnálunk, amely puffer-zónaként szolgál. 4 kimutató zóna A második 5 közbenső zónát követően 2—3 mm széles indikátor-zónákat alakítunk ki, amelyeket kezeletlen papírsávok választnak el egymástól. a) 100 mg ( = 6000 E) peroxidáz 50 ml 0,2 mólos, 7,2 pH-jú pufferrel készített oldatát és b) 400 mg o-tolidin és 75 mg orasolsárga 50 ml etanollal készített oldatát összekeverjük és azonnal a közbenső zóna felett csíkokban felvisszük. A különböző oldatokat egyszerre vagy egymás után vihetjük fel a hordozóra. Az impregnált és megszárított hordozót keskeny, mintegy 2 mm széles csíkokra vágjuk, amelyeket üvegből vagy műanyagból készített 6 mínikémcsövekbe helyezünk. A 6 minikémcsőnek 7 jelölése van, a futtató folyadék bemérésére. A kapilláris kis csövek 6—60 mm hosszúak, belső átmérőjük 2,5—3 mm. A vizsgálat elvégzésére a pirosra festett 2 oemérési zónát kitóljuk a 6 minikémesőből és rövid időre a megvizsgálandó folyadékba mártjuk. A felvett folyadék mennyisége meghatározott. Esetleg jelen levő redukáló anyagok, (főleg aszkorbinsav) oxidálódnak. A glükóz azonban még nem reagál. Utána a csíkot addig húzzuk a csőbe, míg az alsó széle mintegy 5 mm-rel a 7 jelölés felett van. Attól függően, hogy egyedi vagy sorozatos meghatározásról van szó, a vizsgálatot azonnal vagy egy tetszőleges későbbi időpontban végezzük. A kapilláris 6 minikémcsövet desztillált vízbe merítve a 7 jelölésig megtölt jük, és utána a teszt-csíkot függőlegesen a vízbe helyezzük. A kapilláris erő következtében a vizsgálandó folyadék a vízzel együtt felfelé difi'undál, a különböző zónákon áthaladva, A glükóz reakcióba lép, egy vagy több indikátor-zóna elszíneződik, és ez a 8 skálán leolvasható. « 7 A diffúzió befejeződése után a csíkot tetszőleges időpontban olvashatjuk le, illetve értékelhetjük ki, hiszen a színe már nem változik. A 2 bemérési zóna kialakításához a káliumpermanganát helyett bármely egyéb alkalmas oxidáló vagy kicsapó szert alkalmazhatunk, a jelző anyagokat szintén variálhatjuk. A 4 kimutató zóna peroxidáz helyett az irodalomból ismert peroxidáz hatású anyagok valamelyikét is tartalmazhatja. A hidrogén-peroxid kimutatására o-tolidin helyett egyéb ismert indikátorrendszert is alkalmazhatunk. 8 3. példa Az ebben a példában ismertetett teszt-csík alkalmas glükóznyomok kimutatására. Az ilyen nyomok lehetnek a viezeletben a hugyrendszer megbetegedése esetén vagy gyermekek vérében, szérumában. 2 bemérési zóna 1. zóna, 10 mm széles, preparálás nélkül. 2. zóna, 10 mm széles, 0,05 g káliumpermanganát 100 ml vízzel készített oldatával impregnálva. 3 reakciózóna, 10 mm széles a) 1 g benzoesav 50 ml etanollal készített oldatának és b) 1 g glükózoxidáz (30 000 E) 50 ml vízzel készített oldatának elegye vei impregnálva. 4 kimutató zóna, 10 mm széles a) 200 mg (=6000 E) peroxidáz 50 ml 0,2 mólos, 7,2 pH-jú pufferrel készített oldatának és b) 1 g o-tolidin és 50 mg orasolsárga 50 ml etanollal készített oldatának elegyével impregnálva. Az oldatokat egyszerre vagy egymás után visszük fel a hordozóként használt 220 g/m2 négyzetmétersúlyú filterpapírra. Szárítás után a papírt mintegy 2 mm széles, 70 mm hosszú csíkokra vágjuk, és a csíkokat kapilláris csövekbe helyezzük. A kapilláris csövek 2,5—3 mm belső átmérőjűek, méretezésük olyan, hogy 40 pl vizsgálandó folyadékot vehetnek fel. Alkalmazáskor a teszt-csíkot kissé a 7 jelölés felé húzzuk, a vizsgálandó folyadékot felszivatjuk és a csíkot visszatoljuk, míg bemerül a folyadékba, Az élettanilag normális glükóz mennyiség igen kicsi, ezért közvetlenül a vizsgálandó folyadékkal (futtató folyadék nélkül) dolgozunk. A mérési eredményt a 8 skálán olvassuk le. Szabadalmi igénypontok: 1. Diagnosztikai eszköz a glükóz kimutatására, amely teszt-csíkból és jelölt kapilláris csőből áll, és a teszt-csík kezeletlen vagy színezékkel, oxidáló-, kicsapó vagy pufferanyaggal impregnált bemérési zónát, reakciózónát és kimutató zónát tartalmaz, amikor is az utóbbi egy vagy több indikátorsávból állhat, ame-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
