182597. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 5-szubsztituált-1-(2'-deoxi-2'-htt-béta-D-arabino-furanozil)-pirimidin nukleozidok előállítására
11 182597 12 számított: 0=26,50%; H = 2,94%; F=4,66%; N = 10,30%; talált: 0=26,55%; H = 3,06%; F=4,44%; N= 10,20%. A biológiai hatás vizsgálata A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek virus-ellenes és tumor-ellenes hatást mutatnak. Azl(2-dezoxi-2-fluor-ß-D-arabinofuranozil)-5-j0d-citozin gátolja az 1. és 2. típusú herpes simplex vírus (HSV—1 illetve HSV—2) szaporodását. Az 1. típusból a HFEM, Patton, 2931 és az F-törzs, a 2. típusból a 333 és G-törzs esetében az l-(2-dezoxi-2-fluor-ß-D-arabinofuranozil)-5-jód-citozin 0,01 fzmólos (megközelítőleg 0,004 ug/ml) koncentrációban mutatkozott hatásosnak. Azt találtuk, hogy a HSV—1 típusba tartozó timidin-kináz negatív törzsek (HSV—1 TK~) nem reagálnak az l-(2-dezoxi-(-fluor-3-D-arabinofuranozil)-5-jódcitozinra még 10 pmél koncentrációban sem, ami arra utal, hogy a szelektivitás feltehetően az l-(2-dezoxi-2-fluor-3-D-arabinofuranozil)-5-jód-citozin vírusos timidin-kináz foszforozásának függvénye. A cytomegalovírussal (CMV, AD 169 törzs) folytatott kísérletek azt mutatták, hogy az l-(2-dezoxi-2- fluor-ß-D-arabinofuranozil)-5-j0d-citozin hatásos e vírussal szemben. Ez meglepő, mert a CMV nem rendelkezik saját timidin kinázzal, és a szaporodáshoz fötális enzimet kell termelnie. Az l-(2-dezoxi-2-fluor-ß-D-arabinofuranozil)-5-jód-citozin 1 pmólos (0,4 ug/ml) koncentrációban csökkentette a CMV vérlemezkék kialakulását WE-—38 sejteken. Az l-(2-dezoxi-2-fluor-ß-D-arabinofuranozil)-5-j0dcitozin hatásos dózisait a következő táblázatban adjuk meg. A vizsgálatokat úgy végeztük, hogy az l-(2- dezoxi-2-fluor-ß-D-arabinofuranozil)-5-j0d-citozint fiziológiás konyhasó-oldattal hígítottuk, az oldatot szűréssel sterilizáltuk, majd a sterilizált oldatot inokuláltuk. A vegyület 25 mg/ml koncentrációban jól oldható konyhasó-oldatban. Egereken végzett vizsgálatoknál intraperitoneálisan adagoltuk a gyógyszert. 1. típusú herpes simplex vírus ed50 1. 2931 törzs 0,007 pmól 2. McIntyre törzs *<0,01 pmól 3. Patton törzs 0,01 uniói 4. HFEM törzs * <<0,01 pmól 2. típusú herpes simplex vírus 1. G törzs 0,01 uniói 2. 333 törzs 0,05 pmól Cytomegalovirus ed50 1. ED 169 törzs 1,0 pmól *< =kisebb mint Az olyan (I) általános képletű 2’-fluor-arabinozér ukleozidok ahol a képletben A jelentése amino- ilil—. ve hidroxilcsoport és Rj és R2 jelentése hidroglnatom gátló hatását a herpes simplex vírus 1. típusáank (HSV—1) szaporodására egy Verő sejtrétegen az le táblázatban összefoglalt eredmények mutatják; Y je 1 mtései a következők : Az I. táblázatban Y használt jelölés a hidrogénatom b fluoratom c klóratom d brómatom e jódatom 1 metilcsoport, A kísérleteket úgy végeztük, hogy egy Verő sejtréteget megfertőztünk körülbelül 1 vérlemezke képző egységgel (PFU=plaque forming unit) a herpes simplex vírus (HPE—-1) 2931 törzsének egy sejtjére számítva, majd 2 órán keresztül inkubáltuk. Az egyszeres sejtréteget különböző koncentrációjú hatóanyag-oldatokkal vontuk be. 24 óra múltán összegyűjtöttük a felülúszó folyadékokat, és a Verő sejtrétegeket Lopez és munkatársai: Ann. N. Y. Sei., 284, 351 (1977) módszerével titráltuk. Ezután kiszámoltuk a kontrolihoz viszonyított százalékos gátlást. * A HSV—1 liter %-os csökkenése ; 90% = + ; >99% = + + ; >99,9% = + + + ; >99,999% = + + + + ; a HSV—1 szaporodásának teljes megszűnése = + + + + +; (—) = <90% liter csökkenés. ** Wright és munkatársai: J. Med. Chem. 13, 269 (1970), lásd még Reichman és munkatársai: Carbohydr. Rés., 42, 233 (1975). f Valamennyi e táblázatban felsorolt pirimidinnukleozid semleges formában van, a IVe vegyület kivételével, amely hidroklorid-sója formájában van. + + ND=nem vizsgáltuk (not done) + 4- + A sejtnövekedés 50%-os gátlásához szükséges koncentrációk in vitro, 96 óra után, 37 °C-on végzett inkubálás esetén. Az l-(2-dezoxi-2-fluor- ß-D-arabinofuranozil)-5-j0dcitozin in vivo kísérletekben is aktívnak bizonyult. A/J egereket a 2931 HSV—1 törzs LDä0 dózisának megközelítőleg 50-szeres adagjával intraperitoneálisan inokuláltunk, majd 24 óra elteltével megkezdtük l-(2- dezoxi-2-fluor-ß-D-arabinofuranozil)-5-j0d-citozin adagolását. A vegyület et 5 napon keresztül napi 10 és 1 mg/testsúly kg dózisokban adagoltuk. A nem kezelt egerek az inokulációt követő 8. napon elpusztultak. A 10 mg/kg/nap dózissal kezelt 10 egérből 5 túlélte a 21 napos kísérletsorozatot. Az 1 mg/kg/nap dózissal kezelt egerek közül kettő élte túl a 21 napos kísérletsorozatot, míg a többi állat átlagosan 10 nappal az inokuláció után pusztult el. Megállapítható, hogy az 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 7
