182544. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hidroxi-alkil-purinok aminoalkanollal és p-acetamido-benzoesavval alkotott komplexei előállítására
37 182 544 ját számlálóval meghatározzuk, és RPMI 1640 tápoldattal 5-10® sejt/ml koncentrációra állítjuk be. Mikrotiter lemez-meghatározás. A mikrotiter meghatározásokat 0,2 ml inkubációs térfogatban végezzük, amelyben 5-105 sejt és ConA (concanavalin A) vagy ConA és a megfelelő vegyületek vannak a megadott koncentrációkban. Minden meghatározást 6 párhuzamos kísérletben végzünk, és csak sejteket tartalmazó vakpróbával hasonlítjuk össze. A vizsgálati lemezeket 37 °C-on 4 napig inkubáljuk 5% széndioxid mellett. Az inkubálás utolsó 18—20 órájában 0,5 ml 3HTdR-t (triciált timidint) (10 p,Ci/ ml, 6 Ci/mmól) adunk minden egyes tenyészethez. A tenyészeteket többcsatornás automatikus mintagyőjtő egységgel (MASH-unit) összegyűjtjük, és a beépült 3HTdR-t Beckmann LS 8000 folyadékszcintillációs számlálóval határozzuk meg, ezt tekintjük a sejtszaporodás mértékének. Az eredményeket a Con A-val vagy ConA-val és a megfelelő vegyülettel kezelt tenyészetben és a kontroll tenyészetekben talált aktivitás arányaként táblázatban összesítjük. A vagy NPT 15392 ,vagy NPT 15410 jelzésű vegyülettel történő in vivo kezelés fokozza a lépsejtek ezt követő válaszát in vitro Con A stimulációra szuboptimális mitogén koncentrációnál (5 pg/ml). így az NPT 15410 vegyület a stimuláció arányt 100:l-re fokozza a placebo 55:1-hez képest. Lényeges különbségeket nem észleltünk a NPT 15392 vagy a 15410 vegyülettel való kezelésnél, ha a sejteket optimálisabb koncentrációban (10 |i.g/ml) kezeltük Con A-val. Vizsgáltuk a Con A-val stimulált sejtek ezt követően in vitro 1 pg/ml NPT 15392 és NPT 15410 vegyülettel való kezelésének hatását is. Mindkét vegyület kifejezett képességet mutat a Con A stimuláció fokozására, különösen a szuboptimális mitogén koncentrációnál (5 jxg/ml) és kisebb mértékben 10 ug/ml-nél. 5 [xg/ml Con A koncentrációnál az NPT 15392 stimuláció 2,8- szorosa az egyedül a Con A-énak, míg NPT 15410 esetén ez 3,3-szeres. Ezek az eredmények a vegyületek immunmodulátor hatását jelzik a lépsejt szaporodásra. Állatoknak olyan vegyületekkel való előkezelése, amelyek érzékenyítik a sejteket az ezt követő mitogén stimulálásra, a sejteket az ez utáni in vitro mitogén stimulációnál fokozott szaporodási válaszra serkenti, különösen olyan körülmények között, ha egyedül a mitogénre való válasz gyenge. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás hidroxi-alkil-purinok aminoalkanollal és p-acetamido-benzoesavval alkotott I általános képletű 5 komplexei előállítására — ebben a képletben X jelentése hidroxil-, amino- vagy merkapto-csoport ; R1 jelentése hidrogénatom vagy 1—8 szénatomos alkilcsoport ; 10 R2 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport ; Y egy II általános képletű aminoalkanolnak, amelyben R3 és R4 1—4 szénatomos alkilcsoport és n értéke 2, 3 vagy 4, p-acetamido-benzoesavval képzett sóját jelenti; és 15 z értéke 1, 2, 3 vagy 4 — azzal jellemezve, hogy egy IA általános képletű hidroxi-alkil-purint — R1, R2 és X a fent megadott jelentésű — p-acetamido-benzoesavnak II általános 20 képletű aminoalkanollal — R3, R4 és n a fent megadott jelentésű — alkotott sójával reagáltatunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja olyan I általános képletű komplexek előállítá-25 sára, amelyek képletében X hidroxilcsoport, R1 4—6 szénatomos alkil-csoport, R2 metilcsoport, Y dimetilamino-izopropanolnak p-acetamido-benzoesavval alkotott sója, z értéke 3, azzal jellemezve, hogy olyan IA általános képletű hidroxi-alkil-purint, amelynek 30 képletében X, R1 és R2 a fenti jelentésű, dimetilamino-izopropanolnak p-acetamido-benzoesavval alkotott sójával reagáltatunk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganato-35 sítási módja erithro-9-(2-hidroxi-3-noniI)-hipoxantin(di metil-amino-2-propanol-p-acetamido-benzoát) előállítására azzal jellemezve, hogy erithro-9-(2-hidroxi-3-nonil)-hipoxantint dimetil-amino-2-propanol-p-acetamido-benzoáttal reagáltatunk. 40 4. Eljárás hatóanyagként I általános képletű komplexet — X, R1, R2, Y és z az 1. igénypontban megadott — tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására azzal jellemezve, hogy az 1—3. igénypontok bár-45 melyike szerinti eljárással előállított hatóanyagot a gyógyszerkészítésben szokásos hordozó-, hígító-, töltőés/vagy egyéb segédanyaggal összekeverve gyógyszerkészítménnyé kikészítjük. 38 3 rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 85.4065/40 — Zrínyi Nyomda, Budapest 20
