182544. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hidroxi-alkil-purinok aminoalkanollal és p-acetamido-benzoesavval alkotott komplexei előállítására
182 544 herpes szérumot tartalmazó 5 ml törzsoldattal, vagy 0,2 ml anti-herpes szérumot tartalmazó 5 ml vizsgálandó vegyületet is tartalmazó táptalajjal kezeljük. Az anti-herpes szérumot agaróz helyett használjuk, hogy a tápoldatban levő néhány szabad vírus semlege- 5 sítésével lokalizáljuk a foltokat. A palackokat 5 percig hagyjuk állni szobahőmérsékleten, majd ezután 37 °C- on 2 napig inkubáljuk. Háromszor osztódott kultúrákat használunk a legtöbb vizsgálathoz. Utána 10 ml foszfáttal pufferolt sóoldatot adunk 10 minden egyes palackhoz. A felső réteget óvatosan rá-23 zogatjuk, majd kiöntjük a palackokból. Az egyrétegű sejttenyészeteket 50% metanol és háromszor desztillált víz elegyével készített 0,5 súly/térf%-os kristályibolya oldattal megfestjük. A foltokat vagy áteső fluoreszcens fényben közvetlenül számoljuk makroszkopikusan vagy fénymikroszkóppal mikro-foltok esetében. A mikro-foltókat 150- szeres nagyításnál számoljuk, kísérleti csoportonként három területet átlagolva. A vírusellenes hatás egyéb vizsgálatainál a következő eredményeket kaptuk. 24 Vegyület NPT szám %-os gátlás, 0,1—1,0 pg/ml-nél 1,0—10 10—100 <100 Vírus 15392 30—50 — <70 A-4 O Influenza A sertés, 1976 (H1SW—Nj) 15417 50—70 A O Influenza A sertés, 1976 (Hjsvr—A -j ) 15418 <70 <70 Influenza A sertés, 1976 (Hjaw—Nj) 15426 20—3,0 30—50 50—70 50—70 (Orosz) 15410 50—70 30—50 <70 <70 (sertés) Az NPT 15410 vegyület vírusellenes hatásának további vizsgálatai a 3/a táblázatban láthatók. 3/a táblázat Influenza vírus replikációjának gátlása NPT 15410-zel Vírus Koncentrációtartomány (ug/ml) 0,01—1,0 1,0—10,0 10,0—100 100 A (sertés) 76 (H^N^ H—1—f-4 + 4 + 4 4 4 4 4 4 A (Texas) 77 (H3N2) H—h + 4 + 44 + + + + A (Dunedin) 73 (H3N2) NV NV ± 4 4 A (japán) 305 (H2N2) NV NV 4 4 4 4 4 4 4 4 A/PRg (HgNj) 4 4 4 4 4 4 4 4 + + ~b A2-Hong Kong (H2N2) NV NV 4 4 •f + + Rövidítések : NV = nem vizsgáltuk, ± = 10—20% gátlás, + = 20—30% gátlás, 4 4 = 30—50% gátlás, 4 4- + = 50—70% gátlás, H—I—h + = 70% gátlás Az immunmodulációs hatás a 4. táblázatban látható. 13
