182535. lajstromszámú szabadalom • Eljárás baktérium sejt-aggregátumok előállítására
182535 8 a regisztrálón leolvassuk az erőt pound-ban (kg-ban) kifejezve. A szilárdságot tehát azzal az erővel (poundban vagy kg-ban kifejezve) fejezzük ki, amely a részecskének 0,03 in-vel, (0,762 mm) való összenyomásához szükséges. A kísérletet több részecskével megismételjük és az eredmények átlagértékét vesszük. A találmány szerinti eljárás részleteit az alábbi példákkal illusztráljuk. 1. példa 0,675 g aktív anyagot és 0,648 millimól amino-csoportot tartalmazó 2,25 g BETZ 1180 oldatot pH 9-es értéken 13,24 millimól aktív anyagot tartalmazó 100 ml, 1,25%-os (súly/térfogat) glutáraldehidhez adunk. A reakcióelegyet 30 percig keverjük, míg mélysárga színű oldatot kapunk. A terméket a glutáraldehid (1. komponens) és a poliamin-polimer (2. komponens) összsúlyára vonatkoztatva, 64,9 súly% glutáraldehidet és 35,1 súly% poliamin-polimert tartalmazó reakcíóelegyből képezzük. Streptomyces olivaceus NRRL mutáns tenyészetét a 3 625 828 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban ismertetett táptalajt tartalmazó fermentorban keverés és levegőztetés mellett tenyésztünk. A kapott bakteriális sejtek tömegét tartalmazó fermentlé pH-értékét megfelelő puffer-anyaggal 8,2-re állítjuk. A fermentlé egy részéhez fentiek szerint előállított térhálósított termék olyan mennyiségét adjuk, hogy a glutáraldehid mennyisége a baktérium sejtek szárazsúlyára vonatkoztatva 14 súly% (a teljes reakciótermék 21,6 súly%-a) legyen. A reakcióelegyet 25 °C-on pH 8,2-es értéknél 30 percig reagáltatjuk, majd a kezelt fermentlevet szüljük. A szűrőlepényt ezután 2,2 mm-es nyílású fecskendőn keresztül extrudáljuk. A kapott extrudált fonalakat 30 mm hosszúságú darabokra vágjuk, majd éjszakán át egy légfűtéses szárítószekrényben 65 °C-on szárítjuk. A fermentlé azonos mennyiségét, a baktérium sejtek szárazsúlyára vonatkoztatva, 14 sűly% glutáraldehiddel kezeljük. A kezelt sejteket szüljük, extrudáljuk és a fentiekhez hasonló módon szárítjuk (kontroll anyag). Mind a kontroll, mint a találmány szerinti térhálósított anyaggal kezelt termék szilárdságát meghatározzuk. A kontroll minta szilárdsága 0,8 lb.(0,364 kg), a találmány szerinti eljárással előállított mintáé 2,8 lb. (1,27 kg). 2. példa Az 1. példában ismertetett Streptomyces olivaceus fermentlé egy részét az 1. példában megadott módon glutáraldehiddel (kontroll) és különböző összetételű térhálósított reakciótermékkel kezelünk pH 9 -es közegben 29 °C-on. A különböző összetételű térhálósított termékeket az 1. példában megadott módon állítjuk elő, különböző mennyiségű glutáraldehidet és poliamin-polimert alkalmazva. A kezelt bakteriális sejteket ezután szüljük, extrudáljuk, szárítjuk és meghatározzuk a szilárdságukat. Az eredményeket az I. táblázatban ismertetjük. 7 1. táblázat A térhálósított terméket tartalmazó reakcióelegy Beadagolt összetétele (súly%) mennyiség Szilárdság -------------------—------------------súly% lb. (kg) Glutár- Poliaminaldehid -polimer 100 (0,82) (kontroll) 13,9 1,8 76,7 23,3 13 2,7 (1,23) 40,0 60,0 34,7 2,7 (1,23) 44,4 55,6 18,7 3,3 (1,5) 65,1 34,9 29,8 3,6 (1,64) Az eredményekből látható, hogy a térhálósított termék alkalmazásával jelentősen nagyobb szilárdságú sejt-aggregátum állítható elő, mint az ismert eljárással egyedül glutáraldehidet alkalmazva. 3. példa 0,188 g cianúrsav-trikloridot (0,64 millimól) 10 ml acetonban oldunk, majd az oldatot keverés közben 70 ml jéghideg vízhez adjuk. Finom eloszlású csapadékot kapunk. A BETZ 1180 oldat 2,25 g-ját (mely 0,675 g aktív anyagot és 0,648 millimól amino-csoportot tartalmaz) 20 ml vízzel hígítjuk és hozzáadjuk a cianúrsav-triklorid szuszpenzióhoz. A kapott elegyet pH 9-es értéken, 0-5 °C-on 1-2 órán át keverjük, majd 100ml-re hígítjuk. A cianúrsav-triklorid feloldódik a poliaminnal való reakciót jelezve. 21,8 súly% cianúrsav-trikloridot (1. komponens) és 78,2 súly% poliaminpolimert (2. komponens) tartalmazó terméket kapunk. A Streptomyces olivaceus fermentlé egy részét az 1. példában megadott módon a fentiek szerint előállított térhálósított termék egy részével elkeveijük, olyan mennyiségben, hogy a térhálósított termék súly%-a a baktérium sejtek szárazsúlyára vonatkoztatva 32,0% legyen. A reakcióelegyhez 0,2% (súly/térfogat) vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldatot adunk a pH 9-es értékre való beállítására. A reakcióelegyet 1,5 órán át pH-9-es értéken és 25 °C-on tartjuk, majd a kezelt fermentieret szüljük, extrudáljuk és az 1. példában megadott módon szárítjuk. A fermentlé egy másik adagját 0,5 órán át kezeljük. A fermentléhez a kezelés soián nem adunk nátrium-hidrogén-karbonát-oldatot, a szűrt sejteket azonban 1 súly% 9-es pH-jú nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk az extrudálás és szárítás előtt. A kontroll anyag előállítására a fermentlé egy adagjához, a baktérium sejtek szárazsúlyára vonatkoztatva, 14 súly% glutáraldehidet adunk. A sejteket a szűrés, extrudálás és szárítás előtt, 25 °C-on pH 8,2-es értéken 30 percig kezeljük a glutáraldehiddel. A kontroll termék szilárdsága 2,2 lb (1 kg), míg a 0,5 órán át kezelt termék szilárdsága 3,8 lb, (1,73 kg), az 1,5 órán át kezelt termék szilárdsága 4,0 lb. (1,82 kg). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
