182531. lajstromszámú szabadalom • Eljárás z-2-(acil-amino)-3-(monohtt)-propenoátok előállítására
13 182531 14 1. példa In vitro kísérleti adatok 7,1-es pH-jú, 50 millimól MOPS puffert tártál- 5 mazó 1 ml-es kísérleti rendszert használunk. Ehhez 5jug, sertésből izolált renális enzimet, illetve olyan mennyiségben kísérleti vegyületet adunk, hogy a rendszerre vonatkoztatott végső koncentrációja 0,1 millimól legyen. 37 °C-on 5 percen át végzett inku- jq hálást követően a rendszerhez olyan mennyiségű GDP-t adunk, hogy végső koncentrációja a rendszerben 0,05 millimól legyen. A rendszert ismét 37 °C-on 10 percen át inkubáljuk, majd a GDP hidrolízisét a 275 nanométernél az idővel az optikai sűrűségben bekövetkező változás útján mérjük. Az enzim inhibitálását olyan összehasonlító kísérlettel való összehasonlítás alapján állapítjuk meg, amelyben nem alkalmazunk inhibitáló hatású vegyületet. Az észlelt eredményből százalékos inhibitálási értéket számolunk. A Kj az a konstans, amely jelzi az inhibitáló vegyületnek azt a koncentrációját, amelynél az enzim inhibitálási értéke 50%. Ez egy számított érték olyan in vitro kísérletek sokaságánál kapott értékekből, amelyeket az 50%-os inhibitálási értéknél alacsonyabb és magasabb koncentrációknál hajtunk végre. A kapott eredményeket az I. táblázatban adjuk meg. I. táblázat R1 helyén hidrogénatomot hordozó I általános képletű vegyületek inhibitáló hatása Kísérleti vevegy ület száma R3 R2 Százalékos inhibitálás 10~4M koncentrációnál Ki(pM) 1.-CH2CH3 2,2-dimetil-ciklopropil-98 0,18 2.x-ch3 2,2-dimetil-ciklopropil-98 0,39 2a.x-ch3 2,2-dimetil-ciklopropil-100 0,12 2b.x-ch3 2,2-dimetil-ciklopropil-19,8 3.-ch3 2-metil-cildopropil-92 1,7 4.-ch2ch3 ^CH3-ch2-ch ^ch3 87 3,2 5.-ch3-CH2CH-CH2C(CH3)3 1 81 4,4 ch3 6. -ch3 2,3-dimetil-ciklopropil-83 4,6 7.-ch3 /CH3-ch2-ch nch3 91 6 8.-ch3 ciklobutil-80 6,2 9.-ch3 ciklobutil-metil-83 6,6 10.-ch3 ciklopropil-97 9 11.-ch3-CH2-CH-CH2CH3 82 10 1 ch3 12. -(CH2)4CH2 2,2-diklór-ciklopropil-0,03 13. -(CHjjsN^CHj), 2,2-diklór-ciklopropil-14.-(CH2 )5 N* (CH3 )3 2,2-dimetil-ciklopropü-1,11 8
