182153. lajstromszámú szabadalom • Eljárás helyettesített pirazolo [1,5-a]pirimidin-származékok előállítására
18.:.153 fogatú hipotoniás 50 mmólos Tris.HCl /pH 7,4/ oldatban, vagy 2/ ismét szuszpendáltuk az eredeti felének megfelelő térfogatú hipotoniás, 10 mmólos Tris.HCl /pH 7,4/ oldatban és felhasználásig fagyasztottuk. A fagyasztott Pp-készitményeket felolvasztottuk, és a kísérlet időpontjában az eredeti homogenizáló térfogat négyszeresének megfelelő folyadékban szuszpendáltuk. A kísérlethez 300/ul Pp-frakciószuszpenzlófc /0,2-0,4 mg protein/, 100/ul vizsgált vegyületet és 100/ul ^n-diazepam /1,5 nmól vegkoncentrácio/~vegyszert vagy *H-flunitrazepam /1,0 nmól végkoncentráció/-vegyszert használtunk. Kontrollként a nem-specifikus kötés bemutatására 100/ül diazepamot /3 /ímól végkoncentráció/ és a teljes kötődés bemutatására 100/ul ionmentesitett vizet használtunk a vizsgálni kívánt vegyúlet helyett. Az inkubálást 30 percen át jégben végeztük, majd vákuumban, Whatman GF/G üvegszürőn végzett szűréssel állítottuk le* A szűrőt kétszer 5 ml jéghideg50 mmólos Tris.HCl /pH 7*4/ oldat tál mostuk át, majd az anyagot szcintillációs kémcsövekbe juttattuk. 50-60 °C-on, 30 percen át végzett adtunk 10 ml Beckman Beady-Solve HP-t, és szárítás után hozzáa radioaktivitást Beckman-féle szcintillációs számlálóval határoztuk meg. Azokat a vegyületeket tekintettük aktívnak, amelyek a ^H-benzodiazepin megkötését 20 %-kal gátolták. A kötődés gátlását a teljes kötődés és a vizsgált vegyület jelenlétében mutatott különbségből számoltuk úgy, hogy azt elosztottuk a teljes kötődéssel, és szoroztuk 100-zal. A vizsgálat során például a következő, találmány szerint előállitható vegyületeket találtuk aktívnak. III. táblázat * A "11-benzodiazepin kötődésének gátlása az agy-specifikus receptorokhoz patkányoknál A vegyület kémiai neve Eredmény 7-/3*-piridil/-pirazolo 1,5-a pirimidin-3-karbonsav-etilészter aktiv 2-etil-7-/5,-piiidil/-çirazolo 1,5-a pirimidin-3-karbonsav-etileszter aktiv 7_/3 #_tienil/-pirazolo 1,5-a: pirimidin-3- -karbonsav-etilészter aktiv 7-/3*-piíidil/-pírazolo 1,5-a pirimidin-3-karbonitril aktiv A találmány szerint előállítható uj vegyületek igen hasznosnak bizonyultak a szorongás oldásában emlősöknél, körülbelül 0,1-20,0 mg/testsuly kg/nap dózisban adagolva. Optimális eredmények érhetők el 0*5-10,0 mg/testsuly kg/napi dózisokkal. Olyan dózisegységeket használunk, hogy egy körülbelül 70 kg testsulyu felnőtt személy 24 órás periódus alatt összesen 35- 700 mg aktiv vegyületet kapjon. Ezzel a dózis-tartománnyal biz tositható az optimális terápiás válasz. Például naponta megosztott dózis adagolható, vagy a dózis arányosan esi a terápiás szituációtól függően. A vegyületeket előnyösen orálisan adagoljuk, de bármely alkalmas módon, igy intravénásán, intramuszkulárisan vagy szubkután utón is adagolhatjuk. ita néhány, lökkentheto 6
