182144. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hipikoleszrterémiás hatású vegyületek előállítására fermentációs úton

182.144

E módosított módszert használva a IY képletü vegyület nátriuma ójának ICcQ-értéke a HMG-CoA reduktáz inhibitálásában 2,7 . 10-9 mól, szemben az MI 2J6B fantázianevű ismert vegyület

5,4 • 10-9 mólos értékével.

B. A koleszterin-szintézis ln vivo inhibitálása a II képletü vegyülettel

Him Holtzman-patkányok csoportjainak gyomorba adagoló csövön át 5^-os konyhasóoldatos enulphor-oldatot vagy a kísérleti vegyület emülphorral készült oldatát adjuk be fáz emulphor azonos az EL-620 jelzésű, gyógyászati célra alkalmas'polioxietil-ricinus olajjal /30 etilenoxicsoportot tartalmaz/ melynek viszkozitása 600 - 1000 cPs/. 1, óra elteltével intraperitoneálisan testsúly kilogrammonként 80/uCi ^C-acetátot adagolunk. A

patkányokat 50 perccel később kivéreztetjük, magd a ^C-koleszterint mint a azterin-szintézis mértékét meghatározzuk.

Dózis /mg/kg/

0,15

0,6

1,2

Százalékos inhibitálás

58

51

70

19. példa

Az I. és II képletü vegyület, valamint az ML 256B fantázianevű ismert vegyület szterin-szintézist inhibitáló hatásának összehasonlitasa sejttenyészetben.

Módositással az Alberts, A. és munkatársai által a J. Biol. Chem., 249» 5241 /1974/ szakirodalmi helyen ismertetett módszert - amely a 14c-szterin bioszintézisét méri 14c-ecetsavból egerek L-M sejtjeiből készült tenyészetben - alkalmazzuk.

A kiserleti vegyületnek 10 /ÜL dimetil-szulfoxiddal készült oldatát 5 női ^c-acetáttal együtt egyréteges tenyészetekhez adjuk. 5 órás inkubálás után a sejteket elszappanositjuk, a 14q_ -szterint extraháljuk és szilikagélen vékonyrétegkromatográfiásan izoláljuk, futtatószerként petroléter, dietil-éter és ecetsav 75 : 25 arányú elegyét használva. A 14c_azterint tartalmazó régiót a lemezen úgy azonos itjuk, hogy a lemezt elemi jóddal megfestjük és a l^C-tartalmat folyadékszcintillációs számlálással megállapítjuk.

A fenti módszert használva a II képletü vegyület ICn0-értéke a HMG-CoA reduktáz gátlásában 17 nanomól, mig az I képletü 22 nanomól és az ML-256B vegyületé 46 nanomól.

Szabadalmi igénypontok

1. Eljárás a hipokoleszterémiás hatású I, II, III és IY képletü vegyületeknek, továbbá a III és IV képletü vegyületek Oyosyászatila^ elfogadható sóinak, valamint a III képletü vegyület 1—4 3zenatomszámu alkilésztereinek előállítására, azzal jellemezve, hogy az Aspergillus terreus genushoz tartozó valamelyik mikroorganizmust tapközegen tenyésztjük, majd a termékeket elkülönítjük és kívánt esetben a III és IV képletü vegyüle-23