182144. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hipikoleszrterémiás hatású vegyületek előállítására fermentációs úton
182.144 JLoexu. A rendszert ezután 130 fordulat/çero sebeaségü rázaéa 4.7 liter/szekundum sebeaségü levegőztetés mellett 28°C- 96 órán át inkubáljuk. 1 litert, táa on B. Az I képletü vegyület elkülönítése Az A. lépésben kapott tenyészet 420 liternyi mennyiségéhez közel 17 kg kovasavtartalmú szűrési segédanyagot adunk? majd az igy kapott keveréket átszűrjük 457*2 mm-es szürőpreaen. A tiszta, 6,6-es pH~ju szürlet pH-ját ezután 450 ml tömény sósavoldat óvatos adagolása utján 4,0-ra beállítjuk és ezután a szürletet közel harmadnyi térfogatú /mintegy 144 liter/ etil-acetáttal végzett keverés utján extraháljuk. Elválasztás után a felső oldószeres fázist eltávolítjuk, a vizes fázist pedig ismét 144 liter etil-acetáttal extraháljuk hasonló módon. Elválasztás után a két extraktumot összeöntjük, majd mintegy 45 liter vízzel végzett keverés utján mossuk. Elválasztás után az etil-acetátos oldatot vákuumban 30°C alatti hőmérsékleten koncentráljukj először egy keverős üstben, végül pedig forgó vákuumbepárloban úgy, hogy maradéktérfogata 3,8 liternél valamivel kevesebb legyen. Az előző bekezdésben ismertetett extrahálási művelettel kapott etil-acetátos koncentrátumból közel 3800 ml-t tovább koncentrálunk forgó bepárlóban közel 10 mmHg nyomáson és 40°C-os fürdőt használva sziruppá, amelyet azután még kétszer koncentrálunk 1-1 liter metilénklorid adagolását követően. így a szirupot a çolàris oldószertől megszabadítjuk. A végül mintegy 300 ml térfogatú olaj a szárazanyagtartalomra végzett meghatározás szerint mintegy 250 g szilárd anyagot tartalmaz. Az olaj térfogatát ezután etil-acetát és metllén-klorid 30 ï 70 térfogat arany u elegyével közel 750 ml-re növeljük, majd az igy hígított olajhoz 200 g szilikagélt adunk keveres közben, szuszpenziot kapva. Ezt a szuszpenziót ezután felrétegezzük olyan oszlop tetejére, amelynek mérete 14 cm . 36 cm és amely azonos mihős égü szilikagélből 2,5 kg-ot tartalmaz 7,5 liter térfogatban az előbb említett oldószereleggyel készült szuszpenzió formájában. Ezután megkezdjük az oszlop eluálását ugyanezzel az oldoszereleggyel, 3 liter eluátumot szedve az eloszakaszban. Ezután az oszlop eluálását etil-acetát és metilén-klorid 50 í 50 térfogatarányu elegyével folytatjuk, 800 ml-es frakciókat szedve. 12 frakció szedése után az eluálást 100 %-oa etilacetáttal folytatjuk 7 további frakciót szedve, majd áttérünk fOO %—03 acetonnal végzett eluálásra. A 4 - 24. frakciókat bioaktivitásuk megállapítása céljából az 1. példában ismertetett HMG—CoA reduktaz inhibitálási vizsgálatnak vetjük alá. Lényeges aktivitást találunk a 7 - 11. frakciókban. A csucsaktivitás a 8. frakció esetén tapasztalható. Ezt a frakciót olajjá koncentráljuk további tisztítás céljából; szárazanyagtartalma 9,0 g. A 8. frakciót tehát bepárlása után 50 ml metilén-klóriddal eldörzsöl^ük, majd a kapott szuszpenziót szűrjük. A szűrőlepény száritasa után 4,9 g súlyú. A szürletet felvisszük 50,8 mm belső átmérőjű és 1 m hosszú, metilén-kloridban duzzasztott és azzal is ekvilibrált Sejphadex LH-20 dextrángéllel /gyártója a Pharmacia AB uppsalai svéd cég/ töltött oszlopra, majd az oszloçot metilén-kloriddal 15 ml/perc eluálásl sebesség mellett elualjuk. Az I képletü vegyület 0,64 és 0,81 oszloptérfogatok között eluálódík. E csúcsból az oldószert eltávolítjuk, közel 13
