182087. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a normál és leukémiás mieloid sejtek szaporodását szelektíven gátló hatóanyagok előőllítására
182.087 uy tárgya eljárás egy az egészséges fehérvérseji,ti„ .v ; ütne tó, a u orrnál la és leukémiás myeloid sejtek 3zapc:o(in;j;H, <j3^] ekt i von gátló gyógyszerkészítmény előállítására. Ismeretes, hogy a rosszindulatú daganatok kemoterápiájában használatos citosztatikua hatóanyagok túlnyomó többsébe, mint az aikilezőazerek, anbimetabolltok, orsómérgek nagy mértékben toxikus vogyületek, amely minden osztódó sejttípust károsítanak. Ezzel szembon a malignus tumorok egyetlen sejttípus kóros elváltozásai és igy szaporodásuk gátlására szelektív hatású vegyületeket lenne kívánatos alkalmazni &ö.: Eckhardt S.: Klinikai onkológia, Medicina, Budapest, 19777] • Ilyen, a tumorsejtek szaporodását specifikusan gátló szerek iránt már eddig ía folytattak széleskörű kutatást és ennek során már mintegy 25 különbözőj egységes sejtszövetekből készült sejtkivonat előállításáról számoltak be, amelyek az egyes sejttípusokat szelektíven gátló természetes regulát orokát tartalmaznak jvö.: Balázs A., Blazsek I.: Control of cell proliferation by endogenous inhibitors, Akadémiai Könyvkiadó, Budapest és Elsevier - North Holland, 19797]« Különösen a fehérvérsejtek /granulocyták/ tisztított kivonataival értek el kedvező eredményeket [Rytömaa és Kiviniemi: Cell Tissue Kinet. 1, 541 /1968/; Paukovits: Nat. Cancer Inst. Monogr. 38, 147 /I973/* Paukovíts és munkatársai; Oncology 34, 187 /19/7/7 . A részlegesen tisztított granulocyta-kivonat biológiai hatékonyságát leukémiás betegeken is demonstrálták [vö.; Rytömaa és munkatársai; Scand. J. Haematol., Suppl. 27, 5 /I976/7; korábban pedig Balázs A. és munkatársai a 162 4^16 számú magyar szabadalmi leírásban ismertették olyan részlegesen tisztított granulocytakivonat emberi- és borjuvérből, vagy peritoneális folyadékból történő előállítását, amely szelektíven gátolja a fehérvérsejtek szaporodását. Mindezek az eddig leirt és előállított kivonatok azonban számos kísérő anyagot tartalmazó, csupán részlegesen tisztított készítmények; az egyes sejttípusok szaporodását szelektiven gátló tiszta hatóanyag előállítása eddig nem volt ismeretes. A fenti idézett magyar szabadalmi leírásban ismertetett kutatómunka továbbfejlesztése során azt találtuk, hogy megfelelő kiindulási anyagokból, főként lóvérből vagy borjulépből nyert fehérvérsejt-kivonatokból különleges frakcionálási műveletek utján oly kémiailag tiszta, egységes, jól jellemezhető, Oligopeptid- jellegű hatóanyag állítható elő, amely már igen kis koncentrációban is szignifikánsan gátolja a myeloid leukémiás sejtek szaporodását. A találmány tárgya tehát eljárás a normális és leukémiás myeloid sejtek szaporodását szelektiven gátló hatóanyag előállítására egészséges fehérvérsejtek kivonatából, amelynek során a/ állati vagy humán vérből, célszerűen lóvérből elkülönített fehérvérsejteket 7 és 8 közötti pH-értékü pufferoldatban homogenizáljuk, a folyékony homogenizatumot centrifugáljuk, a szupernatáns folyadékból molekulaszüréssel elkülönítjük a 10 000-nél kisebb molekulasulyu frakciót, ezt további frakcionálási eljárásnak, célszerűen gél-kromatografálásnak vetjük alá és az 1,15 és 1,45 közötti ve/vQ térfogatnál leváló frakciót /az aktiv és specifikus frakció a ^H-timidin, mint marker eluciós maximuma es a v közé határolható be/ liofilizáljuk, vagy 2
