182037. lajstromszámú szabadalom • Eljátás trijód-tironon meghatározására
182.037 n nszoluM lizúlt antitestet bárt;.) lraaz , majd a vizsgálandó oszlopokat G,-;.y órán ót hagyjuk állni. A gyantát 5 ml izotóniás oldatból /puffer/ mossuk, újból eluúljuk 1 ml 0,5 rnikromólos T,-BCA oldabbol, ág egy órán át állni hagyjuk. A gyantát ismét-5 mossuk 1 ml izobóniás pufferoldatbo1, és az eluáturaban meghatározzuk a T^-BCA konjugátum fajlagos aktivitását. A 2. ábra a T^-BCA konjugátum fajlagos aktivitásának alakulását ábrázolja a szabad koncentráció‘függvényében /abszcissza/. A minimális mennyiség, ami még mérhető 1-2 nanogramm. E/ T^ meghatározása standard humán vérszérumban A fentebb ismertetett eljárással megvizsgáltunk három standard szérumot, egy csökkent, egy normális és e^y túlzott pajzsniirigymüködésu személyt, és a következő eredményeket kaptuk: 110 nanogramm/100 ml; 235 nanogramm/100 ml; 500 nanogramm/ /100 ml. Az eredmények megegyeznek a radioimmunológiai mérésekével. A találmány szerint nyert antitest fajlagosságát a T^-nek a T^-mal az immunszérumért való kompetíciós képességének mérésével értékeltük. Ahhoz, hogy a T^-BOA konjugátum fajlagos aktivitása 2 nanogramm által előidézett hatásnak feleljen meg, 500 mikrogramm T^ szükséges. Tekintettel arra, hogy a T^ koncentrációja egészséges humán vérszérumban körülbelül 80 nanogramm/ml, ennek zavaró hatása a mérési rendszerben elhanyagolható. A rajzok magyarázat a Az 1. ábra a /borjú/ szérumalbumin és a T^-borju szérumalbumin konjugátum UV-spektruma vizes oldatban. Az 1 vonal a borjú szérumalbumin vonala. A 2 vonal a T^-borju szérumalbumin konjugátumé. A 3 vonal a konjugátum 6s a borjú szérumalbumin különgségének spektruma. A 2. ábra a T^-karboanhidráz konjugátum aktivitásának százalékos változását mutatja a szabad koncentrációjának függvényében Az a/ vonal a C - 7 nanogramm/ml tartományt, mig a b/ vonal a 0 - 70 nonogramn/ml tartományt ábrázolja. Az aktivitást az előbbiekben leirtak szerint határoztuk meg. Szabadalmi igénypont Eljárás trijód-tironin meghatározására, azzal jellemezve, hogy a meghatározandó mintában lévő trijód-tironint szérumból és trijód-tironinból előállitott inszolubilizált antitrijód-tironin-antitesttel kromatografálássnl kivonjuk, ezután az oszlopot a trijód-tironnal kovalens kötést képező karboanhidrázzal kezeljük, majd az eluátumban spektrofotometriás módszerrel meghatározzuk a maradék enzimaktivitást. 1 db rajz 6 F.k,: Himer Zoltán Országos Találmányi Hivatal 70 - OTH - 84.086
