182005. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens alfa-amiláz meghatározására
182.005 Meglepően azt találtuk, hogy a maltoheptaóz az *áf»amilás szubsztrátjaként kiemelkedő tulajdonaágokkal rendelkezik, jollebet az erre a óéira már javasolt ollgomaltózonnál * maltopenf taóztól a maitohe^aóa felé haladta áz alkalmasság lényeges csökkenését állapítottuk meg, mivel ezzel lényegesen rosszabb erediményeket értünk el, mint a pentaózzal, Ezért az volt várható, hogy a matlóz-oligoszaoharldláno további hosszabbításával már nem helyesbíthető hibák léphetnek fel# MéglepetésszerUen azonban még jobb eredményeket értünk el, mint a pentaózzal, így a reagens-vakérték Q,Q2 ml-es mintánál maltopentaóz-szubsztrát— esetében 73 %, maltoheptaózzal ellenben csak 13 % a normál körülmények között végzett meghatározás végértékére vonatkoztatva* Ezenkívül még azt találtuk, hogy a maltoheptaóz helyett bizonyos maltoheptaöz-származékok la alkalmazhatók, amelyek az ofamiláz működésekor meghatározott hasítási terméket adnak, amely különösen előnyösen határozható meg. A találmány szerinti eljárás különösképpen az o(-glükozldázzal vagy maltóz-foszforllázzal kapott hasitasi termékek meg* határozásánál megfelelő, ....... " Az o(~giüköBÍdázaal és egy I általános képletü vegyület* tel - ahol R jelentése glükozíd - végzett meghatározásnál a maltoheptaóz, maltotetraóz és maltotrióz hasítási termékei tovább hasadnak glükózzá, és az utóbbit mérjük azután önmagában ismert módon. A keletkezett glükóz mérésére az 0(-glükozldáz jelenlétében különösen a hexoklnáz-eljárés előnyös. A találmány szerinti eljárás ezen kiviteli formájának elvét a következő egyenletek íssmUUetlk. ítf-amlláB maltotrióz + maltotetrámaltoheptaóz maltotrióz + maltotetraóz + + h2o 2H20 5H20 7 glükóz + 7 ATP 0(-glükoziűáz (X-glük02idáz ...................... ■ "I'HIWMMIIII m .■■.jp* ózglükóz glükóz glükóz-6-foszfát 7 glükóz-6-foazfát + 7->7 6-fos zfo-glükons av + 7 NADH + 7 Ír A találmány ezen kiviteli formájához különösen megfelelők a találmány szerint alkalmazott olyan maltoheptaóz-származékok is, tehát az olyan I általános képletü vegyúletek is, ameiyekben E jelentése nem glükozidcsoport* A két enzim, az oC-a* miláz és az oC-glükozidáz, hatására a szubsztituens, tehát egy fenilosoport, mononitro-fenilcsoport vagy dinitro-fenilcsoport illetve a láncvégi szerbit- vagy glükonsav-csoport hasad le, és könnyen meghatározható. A fenilcsoportok lehetnek 0(- vagy^-térálláauak. Ha az o(-t ér állásról van szó, úgy ezek lehaaitasa végbemegy csupán tv.- ami láz ésoí-glükozidáz hatására, és a lehasitott, azubsztitualt vagy szubsztítuálatlan fenolok azután ismert szihreakciókkal könnyen meghatározhatók. A találmány alkalmazható ’ azonban ß-téjcállásu szubsztituensek esetében is. Az utóbbi esetben az ^(-glükozidáz mellett még -glükózidázt is használunk. A dinitro-fenilcsoportok esetében a két nitrocsoport kívánt helyzetben lehet, például 2,4-, 2,6- vagy 3.5-32ubsztitu-: ensekként. 3
