182005. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens alfa-amiláz meghatározására

182.005

Vi za calai; i rends sers

Reakcióelegy összetevői

Till

koncentráció a vizsgálatnál

Na-/K~p^;i-puffer 0,02 mól/1 + NaOl 1Ö mmól/l, pH = 6,9

2,19

14,6 mmól/l foszfát, 7,3 mmól/l 1-TaCl

Magnézium-lclor id 1 mól/1

0,01

3,3 mmól/l

Mait o he p b ur: 1 ükön s av

0,10

5 mmól/l

150/mmól/l

HADP c = 10 mg/ml

0,10

0,38 mmól/l

ATP c = 50 mg/ml

0,10

2,7 mmól/l

Glükonát-kináz 40 egység/ml

0,03

1066 egység/1

6-Fos zfo-glükonsav-dehidrogénaz 24 egység/ml

0,10

800 egvség/1 11,2x1g21" egyaég/1

'-.-Glükózidáz 1120 egység/ml

0,30

Minta /szérum/

0,02

Indulás a minta hozzáadásakor, a mérés 340 vagy 365 nm-en történik.

Hőmérséklet: 25 °C.

Vizsgálati térfogat: 3»00 ml.

7. példa

Megfelelő műanyag vlieat. például Binzer VS 552 jelű ilyen anyagot /vagy más szlvókepes alapanyagot, például papirb/ az alábbi komponenseket tartalmazó oldattal impregnálunk, majd körülbelül 30 percen át 50 °0 hőmérsékleten száritjuk:

7.4 pH-értékü foszfát-puffer natrium-kl or id f enil-O^-D-maltoheptaozid

HSK

monofenoloxidáz

04-glükozidáz

0,05 mol/liter 0,05 mol/liter 10 mol/liter 1 mmol/liter 1000-5000 egység/liter 10.000-50.000 egység/liter

Ezután az impregnált anyagból 6 mm-es csikókat vágunk éa megfelelő hordozóf oliara erősítjük ezeket, majd 6 mm szeles tesztcsíkokat vágunk ki belőlük. Ezek a tesztcsíkok körülbelül 10 /uliter szérum felvitele után különböző intenzitású vörös elszíneződést körülbelül 500 nm/ mutatnak, amelynek az

alapján meghatározhatjuk a az ér um Ov-ami láz-t ártalmát. A kiértékelést vizuálisan végezhetjük például színskálával történő öszszehasonlitással, remisszio méréssel.

8. példa

Az előző példában alkalmazott anyagot az 5» példában.szereplő oldattal impregnáljuk, amelynek a diaforáz-tartalmát azonban 2000 egység/literre növeltük. Az impregnált anyagot 30 percen át 50 ÖC hőmérsékleten szárítjuk, majd a 7* példában leirt módon járunk el. 10/uliter szérum felcseppentése után itt is vörös elszíneződés jelentkezik /}500 nm/, amelyet a 7. példában említett módokon értékelhetünk ki.

12