181974. lajstromszámú szabadalom • Baktériumellenes, új szinergetikus gyógyszer készítmények előállítására
7 181974 8 2. kísérlet ß-Laktamäz specifikus aktivitás 5 A [í-laktamáz specifikus aktivitást jodometriás eljárással 30°-on határoztuk meg Perret módszerével [C. J. Perret: „Jodometric Assay of Penicillinase”, Nature, 174, 1012—1013 (1954)], azzal az eltéréssel, hogy a 0,2 molos foszfát-pufferoldat (pH=6,5) helyett 0,1 mo- 10 los foszfát-pufferoldatot (pH=7,0) használtunk. Egy egység ß-laktamäz-ak ti vitás a ß-laktamäz azon menynyiségének felel meg, amely 8 mmol szubsztrátumot tartalmazó 0,1 molos foszfát-pufferoldatban (pH=7,0) 1 ;j.mol/óra T-1551—Na-ot bont el. 15 A 4. táblázat az Escherichia coli TK-3 törzs, a Klebsiella pneumoniae Y-4 törzs és a Pseudomonas aeruginosa S-l 11 törzs ß-laktamäz specifikus aktivitását szemlélteti. 20 4. táblázat Törzs ß-Laktamäz aktivitás (egység/mg száraz súly Escherichia coli TK-3 53 Klebsiella pneumoniae Y-4 30 Pseudomonas aeruginosa S-l 11 5,2 3. kísérlet Baktériumellenes hatás klinikailag izolált törzsekre A Az alábbi kísérletet azért végeztük, hogy megvizsgáljuk, vajon a találmány szerint előállított készítmények 40 szinergetikus hatása — amit az 1. példában a szaporodás gátlása igazolt —■ együtt jár-e a baktériumellenes hatással. Egy kórokozó baktériummal kb. 108 csíra/ml arányban beoltottunk egy olyan táptalajt, amely 50 [xg/ml T-1551—Na-ot, vagy 25 jag/ml T-1551—Na-ot és 25 [xg/ml meticillin-nátriumot, vagy 50 ug/ml meticillin-nátriumot tartalmazott. A beoltott táptalajt 37°-on inkubáltuk, és a tenyészlében előre meghatározott időközökben meghatároztuk az élő csírák számát. A kísérleti eredményeket az 1. és 2. ábra szemlélteti. Bebizonyosodott, hogy a T-1551—Na és a meticillin-nátrium együttes alkalmazása a baktériumellenes hatást fokozza. A T-1551—Na vagy a meticillin-nátrium minimális gátlókoncentrációja Escherichia coli TK-3 törzs vagy Klebsiella pneumoniae Y-4 törzs ellen minden esetben több volt, mint 800 ;ig/ml. 4. kísérlet A kombinált alkalmazás hatása egerek kísérleti fertőzésére ICR törzsbeli, 4 hetes hím egereket (csoportonként ötöt) peritoneálisan beoltottunk az előírt számú, 5%-os mucinban szuszpendált kórokozó baktériummal. A beoltás után 1, illetve 2 órával az 5. táblázat szerinti kísérleti készítményeket szubkután beadtuk, hogy a védőhatást megvizsgáljuk. Az eredményeket az 5. táblázat szemlélteti, ahol a védőhatást EDí0-ben fejeztük ki. 5. táblázat Fertőző baktérium Kiváló dózis (csíra/egér) ED50, mg/egér T—1551—Na + meticillín-Na (2: 1) T- J 551-Na MeticiJIin-Na K. pneumoniae Y—4 K. pneumoniae Y—53 5,7 x 107 4,8 1,0 xlO7 1,66 >26,8 >10,0 >50 >46,6 5. kísérlet 60 Az 5. táblázatból kitűnik, hogy a T-1551—Na és a meticillin-nátrium kombinált alkalmazásának a szinergetikus hatását a kórokozó baktériumok szaporodásának a gátlására — amit in vitro megállapítottunk — igazolta a kísérlet is, amellyel az állatokat a fertőzéstől megvédtük. Az 1. kísérlet szerinti eljárást ismételtük meg, azzal az eltéréssel, hogy a meticillin-nátrium helyett kálium-klavulanátot alkalmaztunk, és a kísérleti baktériumok a 6., 7. és 8. táblázat szerintiek voltak. így a 6., 7. és 65 8. táblázatban feltüntetett eredményeket kaptuk. 4
