181746. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vinblasztin- és leurozidin-szjármazékok előállítására
5 181746 6 Hasonló körülmények között, de festett szövettenyészeteket alkalmazva lehetőség nyílt finomabb különbségek megfigyelésére, melynek alapján öt fokozatba sorolható az észlelt hatás. Éspedig 1. fokozat: a minimális hatást előidéző dózisra 5 jellemző, hogy megemelkedik a blokkolt mitózisok aránya. Ezek egy része torz, például 3-csoportos mitózis, vagy a póluson elhelyezkedő különvált néhány kromoszóma. Az anafázisok rendszerint eltűntek. A második-fokozat, amikor erős metafázis- io -blokk jelentkezik, szabályos mitózis gyakorlatilag nincs. A kromoszómák laza gomolyban helyezkednek el. Az interfázis sejtek aránya alacsony. A harmadik erősségi fokozat, amikor a kromoszómák összecsapzódva (koaleszkálva), egyetlen sűrű masszá- 15 ban helyezkednek el a sejt közepén. Ez a piknomitózis, vagy „Ball-Metaphase”. A negyedik fokozat, amikor már az interfázis sejteken jelentkezik a hatás oly módon, hogy viszonylag kevesebb a blokkolt sejt, mert nem képes mitózisba lépni. A sejtek citoplaz- 20 mája (interfázisban) kiterült, a citoplazma szegély szabálytalan, „rojtos”, a sejt gyakran megnyúlt, fibroblaszt-szerű alakot vesz fel. Végül az ötödik fokozat esetén a citoplazmát finom retikuláris struktúra tölti ki, és egyértelmű, hogy az interfázis sejt a 25 kezelés hatására elpusztult, szinte fixálódott. Ezeket a fokozatokat a jelenlegi anyagok esetében jól el lehetett különíteni. A fentiek alapján a következőt lehetett megállapítani: leghatásosabb anyag a heptoxi- és az allil-oxi-származék. Ezek már 0,001 Mg/ml dózisban erős metafázisblokkot idéztek elő. A pinomitózis 0,1 Mg/ml dózisnál, az interfázis-sejt hatás 1—10 Mg/ml dózisoknál jelentkezett. Az izobutoxi-származék és ciklohexil-oxi-származék egy nagyságrenddel gyengébben hatott: a 0,001 Mg/ml legalacsonyabb dózisnál még szabályos mitózisok előfordultak. Végül a leggyengébben hatott a benziloxi-származék, amely a legalacsonyabb dózisnál minimális blokkot hozott létre, néhány torz mitózissal, de anafázisok már nincsenek jelen. 0,01 Mg/ml-nél közepes mértékű a blokk; az erős blokk, valamint a piknomitózis csak 1 Mg/ml dózisban jelentkezik. Az új vegyületek hatását i.p. transzplantálható tumorokra (P388 egérleukémia és NK/Ly ascites lymphoma) a következőkben ismertetjük. A P388 leukémiát BDFj hybrid egerekben tartjuk fenn és a kísérletekhez 6-6 egérből álló csoportoknak 106 tumorsejt/állat ip. transzplantáljuk. A transzplantálást követő 24. órában kezdjük meg az új vegyületekkel naponta adott ip. kezelést, és az állatok testsúlyát és állapotát minden nap ellenőrizzük. A kezelt állatokon elért hatást a kontroll csoport napokban kifejezett átlagos élettartamának százalékában fejezzük ki. ■“"Az alábbi táblázatból kitűnik, hogy a vizsgált származékok a P388 leukémiás egerek élettartamát mind jelentősen meghosszabbítják. Vegyidet Dózis mg/kg ip. • Átl. élettartam/nap Kezelt (kontroll) Toxicitás kezelt kontroll N-dezmetil-N-(heptoxi-metil)i 8x0,4 14,3 10,3 139-vüiblasztin 8x4,0 18,7 10,3 181 nem észleltek 8 x 8,0 21,3 9,9 217 N-dezmetil-N-(benziloxi-metil)-vinblasztin 8x0,4 13,0 10,3 126 8 x 4,0 18,3 10,3 178 nem észleltek 5 x 8,0 19,2 9,9 195 N-dezmetil-N-(izobutoxi-metil)-vinblasztin 8x0,4 13,7 10,3 133 8x4,0 20,0 10,3 194 nem észleltek 8 x 8,0 20,5 9,9 208 N-dezmetü-N-(metoxi-metü)-vinblasztin 8 x 1,0 12,7 10,3 122 8x 2,0 18,7; 16,8 10,5 178;155 8x4,0 19,0; 17,7 11,1 171; 163 nem észleltek 8 x 6,0 19,2 10,5 182 8 x 8,0 18,7; 20,2 10,8 172; 205 N-dezmetil-N-(propoxi-metü )-vinblasztin 8x1,0 15,0 10,3 145 8x 2,0 20,8 10,5 198 8x4,0 19,0 11,1 171 8 x 8,0 20,2 9,9 205 8 x 10,0 14.7 10,3 142 toxikus* 3
