181731. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 6-[D-2-D-2-amino-3-N-metil-karbamoil-propion-amido)-2-p-hidroxi-fenil acetamido]-penicillánsav tisztítására
9 181731 10 sav-trietilamin-só 400 ml vízben készített oldatát és a reakcióelegyet 30 percig keverjük —5 °C és 0 °C közötti hőmérsékleten. Az így kapott pH-értékét ezután 5%-os vizes citromsav-oldattal 3-ra állítjuk be és a reakcióelegyet 1000 ml tetrahidrofurán és 500 ml etil-acetát elegyével extraháljuk. Az extraktumot vízzel mossuk, szárítjuk és 40 °C alatti hőmérsékleten az oldószer eltávolítása céljából bepároljuk. A visszamaradó anyagot éterből kristályosítjuk. Sárga tűk formájában 133 g 6-[D-2-(D-2-o-nitrofenil-szulfenilamino -2-N-metilkarbamoil-propionami - do)2-p-hidroxifenil-acetamido]-penicillánsavat kapunk. Olvadáspont: 165-167°C (bomlás) IR»maJ*01 (Cnr‘): 3400’ 3250> 1780> 1730> 1640 (2) 1000 ml metanol/tetrahidrofurán (4:1) elegyhez hozzáadunk 64,6 g (1) szerint előállított terméket és 27,4 g tiobenzamidot és a reakcióelegyet 40 percig keverjük szobahőmérsékleten. Az így kapott reakcióelegyet az oldószer eltávolítása céljából 30 °C alatti hőmérsékleten bepároljuk. A visszamaradó anyagot feloldjuk 257,0 ml vízben, majd hozzáadunk 8,0 g aktív szenet és a reakcióelegyet keverjük. A kapott reakcióelegyet leszűrjük és az oldhatatlan anyagot kis mennyiségű vízzel mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékot egyesítjük. 257,0 ml vizes nyers N’-metil-D-aszparaginil- amoxicillin-oldatot kapunk. A vizes oldat 150 mg/ml N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillint tartalmaz (tisztasága 79%). A nagynyomású folyadékkromatogram, amelyet az (A) feltételek mellett vettünk fel, az 1. ábrán látható. (B) N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin tisztítása 800 ml, előzetesen vízzel duzzasztott sztirol-divinilbenzol kopolimer gyantát (pórustérfogata 1,077 ml/g, fajlagos felülete 718,0m2/g, szemcsemérete 280-370 p, gyártja Mitsubishi Chemical Industries Ltd., márkaneve Diaion HP—20) oszlopba (átmérője 5,25 cm, magassága 37,0 cm) töltünk. Az (A) szerint kapott 170 ml vizes oldatot (a nyers N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin vizes oldatát) a N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillinnek a gyantán való adszorbeálása céljából átvezetünk az oszlopon. Az oszlopon azután 2,0 térsebességgel (26,7 ml/perc áramlási sebességgel) vizet engedünk át és 900 ml-enként frakciókat gyűjtünk. Minden frakció esetén 272 nm-en végzett ultraibolya abszorpciós vizsgálattal meghatározzuk a frakcióban levő anyagot. Az (A) és (B) szennyeződés az 1. illetve a 2. frakcióban van, míg az N-metil-D-aszparaginil-amoxicillint a 3—17. frakciók tartalmazzák. A fenti műveletek során a (C) és (D) szennyeződés nem eluálódik. A 3-17. frakciókat egyesítjük és így 13 500 ml vizes N’-metil-D-aszparaginil- amoxicillin-oldatot kapunk. A kapott vizes oldat 1,78 g/ml N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillint tartalmaz. Kitermelés: 94,1%. Nagynyomású folyadékkromatográfia [(A) feltételek mellett vizsgáljuk]: a vizes oldatban szennyeződés nem mutatható ki. A kapott vizes oldat liofilizálásával fehér por alakjában kapjuk az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillint. IRÄo1 (cm'1): 3280, 1760, 1660 Vékonyrétegkromatográfia (szilikagélen, oldószer n-butanol/ecetsav/víz 4:1:1 arányú elegye): Rf = 0,43. 2. példa 800 ml előzetesen vízben duzzasztott sztirol-divinilbenzol kopolimer gyantát (pórustérfogata 1,077 ml/g, fajlagos felülete 718,0 m2/g, szemcsemérete 280-370 p, gyártja Mitsubishi Chemical Industries Ltd., márkaneve Diaion HP-20) oszlopba (átmérője 5,25 cm, magassága 37,0 cm) töltünk. 167 ml 1-(A) példa szerint előállított vizes oldatot (a nyers N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin vizes oldatát) az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillinnek a gyantán való adszorbeálása céljából átvezetünk az oszlopon. Az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillinnek a gyantán való adszorbeálódása után az oszlopon egymás után vizet (1800 ml) és 8 térf/térf.%-os vizes etanolt vezetünk át 2,0 térsebességgel és 900 ml-enként frakciókat gyűjtünk. A fenti művelet során az (A) és (B) szennyeződés az 1. illetve a 2. frakcióba, míg az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin a 3—6. frakciókba eluálódik. A (C) és (D) szennyeződés ennek a műveletnek a során nem eluálódnak le a gyantáról. A 3-6. frakciókat "egyesítjük és így 3600 ml vizes nyers N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin-oldatot kapunk. Ez az oldat 6,68 mg/ml N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillint tartalmaz. Kitermelés: 96%. Nagynyomású folyadékkromatográfia [(A) feltételek mellett vizsgáljuk]: a vizes oldatban szennyeződés nem mutatható ki. 3. példa 800 ml, előzetesen vízben duzzasztott sztirol-divinilbenzol kopolimer gyantát (pórustérfogata 0,687 ml/g, fajlagos felülete 704,7 m2/g, szemcsemérete 280-370 p, gyártja Mitsubishi Chemical Industries Ltd., márkaneve Diaion HP-40) oszlopba (átmérője 5,25 cm, magassága 37,0 cm) töltünk. 167 ml 1-(A) példa szerint kapott vizes oldatot (a nyers N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin vizes oldatát) az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillinnek a gyantán való adszorbeálása céljából átvezetünk az oszlopon. Az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillinnek a gyantán való adszorbeálódása után egymás után vizet (1600 ml) és 2 térf./térf.%-os vizes etanolt vezetünk át az oszlopon 2,0 térsebességgel és 1000 ml-enként frakciókat gyűjtünk. A fenti művelet során az (A) és (B) szennyeződés az 1., illetve a 2. frakcióba, az N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin pedig a 3—8. frakciókba eluálódik. A (C) és (D) szennyeződések a fenti művelet során nem eluálódnak le a gyantáról. A 3-8. frakciókat egyesítjük és így 6000 ml vizes nyers N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillin-oldatot kapunk. A vizes oldat 4,03 mg/ml N’-metil-D-aszparaginil-amoxicillint tartalmaz. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
