181725. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunoterápiás gyógyszerkészítmény előállítására
3 181725 4 Amennyiben a találmány szerinti eljárásban a lizátumot a tenyészet autolízise útján állítjuk elő, előnyösen olyan folyékony tápközeget alkalmazunk, amely literenként 25,0 g húskivonatot, 5,0 g nátriumkloridot és 1,0 g nátriummonohidrogén-foszfátot tartalmaz (±5%). A beoltott táptalajt három hónapon át 37 C-on inkubáljuk. A leszúrt felülúszó rész a lizátumot képezi. A folyékony vagy szilárd halmazállapotú közeg alkalmazásával kapott lizátumokat a megfelelő mennyiségi arányban összekeverjük. Az alkalmazott törzsek csíraszámai bizonyos határokon belül változhatnak, felnőtt ember számára a napi dózis mintegy 1—50 milliárd csíra. A lizátumok elegyét (első koncentrátumot) centrifugálással és szűréssel tisztítjuk. A kapott koncentrátumot membránszűrés segítségével csíramentesítjük, majd a különböző készítmény-típusok előállításához használjuk fel. A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmény előnyösen a lizátumot liofilizált formában tartalmazó tabletták, kapszulák, zselatin-kapszulák vagy granulátum alakjában, vagy szirup vagy cseppek, illetve ampullák alakjában orálisan adható be. A párénterális beadás vagy - kúp formájában — rektális beadás szintén lehetséges. Felnőttek számára a napi dózis 1—50 miiliárd csírának megfelelő lizátum-mennyiség, amelyet célszerű egyszerre bevenni. Gyerekek számára a napi dózis feleannyi. Farmakológiai kísérletek Balb/c fajtájú egereket az 1. vagy 2. igénypont szerinti készítménnyel stimuláltunk, utána a fajlagos és nem-fajlagos, Immorális eredetű és sejtek okozta immunitásukat vizsgáltuk. Védőhatás vizsgálata Egereknek 5 napon keresztül orálisan 150mg/kg testsúly Üzátumot adtunk. A kezelés kezdete után 10, illetve 30 nappal az állatokat interperitoneálisan Escherichia coli-val megfertőzzük, illetve a kezelés kezdete után 30 nappal enterálisan Salmonella typhimuriummal inokuláltuk. A lizátum védőhatása mindkét esetben statisztikailag szignifikánsan volt kimutatható. A „plakk-képző” sejtek vizsgálata Egereknek 5 napon keresztül 150 mg/kg lizátumot adtunk. A kezelés után 14 nappal lassan növekvő számban olyan lépsejteket figyeltünk meg, amelyek körül litikus foltok (plakkok) alakulnak ki. A fagocitozis kolloid szénnel végzett in vivo vizsgálata Egereknek 5 napon keresztül 150 mg/kg lizátumot adtunk. A kezelés után 10 és 30 nappal kolloid szenet adunk injekció formájában. A kolloid szén a Küpffer-sejteket tartalmazó rendszerből választódik ki. A kolloid kiválasztásának kinetikája a retikulo-endoteliális rendszer aktivitását tükrözi. A fagocitozis-mutató statisztikailag szignifikáns módon emelkedett. A makrofágok aktivitásának vizsgálata Egereknek 5 napon keresztül orálisan 150 mg/kg lizátumot adtunk. A kezelés kezdete után 10 és 30 nappal az állatokból intraperitoneális makrofágokat veszünk. A makrofágok adhéziós képességét és in vitro (Candida albicans) fagocitozisát meghatározzuk. Az eredmények azt mutatják, hogy az alkalmazott lizátumnak az immunitást serkentő hatása van a sejtekre. A makrofágok enzim-aktivitása egyébként jellegzetes módon csökkent, ami valószínűleg a túlságosan igénybe vett sejtek kimerülésére vezethető vissza. Elektronmikroszkóppal készített felvételek az utóbbi feltevést igazolták; az aktivált makrofágokban jellegzetes vakuolumok alakultak ki. Toxicitás Patkányoknak a terápiás felnőtt-dózis 100-szorosát, illetve 1000-szeresét, kutyáknak az említett dózis 20-szorosát, illetve 200-szorosát adtuk be orálisan 13 héten keresztül. Ez alatt az idő alatt sem funkcionális sem szervi elváltozásokat nem észleltünk. Klinikai kísérletek A húgyutak idült fertőzésében szenvedő 17 páciensnek 8-12 hónapon keresztül (havonta 10-15 napon) beadtuk a lizátumot. 14 esetben panaszmentesség állt be visszaesés nélkül, míg 3 esetben az adagolás közötti időszakot nyújtani lehetett. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a húgyutak és a bélcsatorna fertőzéses megbetegedései elleni gyógyszerkészítmény előállítására, amely hatóanyagként az Escherichia coli NCTC-8603, NCTC-8621, NCTC-8622, NCTC-8623, NCTC-9026, NCTC-9111, NCTC-9119, NCTC-9707, NCTC-9708, 1-081', 1-082, 1-083,1-084, 1-085, 1-086, 1-087, 1-088, és 1-089 törzsei közül legalább egyiknek a lizátumát tartalmazza, azzal jellemezve, hogy a fenti törzseket szilárd vagy folyékony tápközegben tenyésztjük, a baktériumokat lizáljuk és/vagy autolizáljuk, a lizátumot elkülönítjük és önmagában ismert módon gyógyszerkészítménnyé alakítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az összes felsorolt törzs lizátumát izoláljuk és összekeverjük. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a törzseket olyan folyékony tápközegben tenyésztjük, amely Éterenként 22,5 g húskivonatot, 7,5 g élesztőkivonatot, 2,5 g nátriumkloridot, 0,5 g nátriumacetátot, 2,0 g nátrium-monohidrogénfoszfátot, 2,0 ml 70 súly%-os nátriumlaktát-oldatot, 2,0 ml 50 súly%-os ammóniumlaktát-oldatot, 3,0 mg aneurint, 3,0 mg nikotinsavat és 3,0 g glukózt tartalmaz, mely értékek ± 5%-kal ingadozhatnak. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a törzseket olyan 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
