181684. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens a kreatinkináz mb meghatározására
9 181684 10 A teszt 1000 (û 1. oldatot, 600 iá 2. oldatot, 200 iá szérum-mintát és 5 100 Ml antitest-oldatot (a 2c példa szerint) összeöntünk. A keveréket 25 °C-on 5 percig előinkubáljuk, majd a teszt-üveget mérőkészülékbe (SAI-fotométer) állítjuk és a reakciót 200 jd, előzetesen 25 °C-on tartott 3. oldat hozzáadásával megindítjuk. 10 Körülbelül 2 perc múlva 20//ml 4. oldattal elvégezzük a belső hitelesítést. Az eredményeket írószerkezet automatikusan felrajzolja. Az ábra szerinti görbét kapjuk. A lineárisan emelkedő görbe az emelkedést tét- 15 szőleges skálarész/perc értékben adja meg, a hitelesítési „lépcső” lehetővé teszi az átszámítást mvolt/ /min egységről //mól/min egységre, vagyis I.U. nemzetközi egység CK-B-re. A 2-es faktorral végzett szorzás után az „I.U.CK-MB” értéket kapjuk. 20 Szabadalmi igénypontok: 25 1. Eljárás kreatinkináz-MB meghatározására szérumban az M alegység immunológiai kikapcsolásával és a B alegység kreatinkináz meghatározására ismert módszerekkel való mérésével, azzal jellemezve, hogy az M alegységnek a reakcióelegyben való kikap- 30 csolására az M alegységgel szembeni antitestekből proteolitikus hasítással, redukáló körülmények között kinyert, adott esetben SH-csoportokon alkilezett, monovalens fragmenseket használunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan antitestekből kinyert monovalens fragmenseket alkalmazunk, amelyek a CK—MB hibrid enzimet több, mint 55%-kal és a CK—MM izoenzimet teljesen gátolják. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan antitestekből kinyert monovalens fragmenseket alkalmazunk, amelyek a CK-MB hibrid enzimet 60-90%-kal gátolják. 4. Bármelyik megelőző igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan monovalens fragmenseket alkalmazunk, amelyekből a teljes antitestek maradékát és a kristályosítható fragmenseket (Fc) elválasztottuk. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy jódacetamiddal vagy jódacetáttal alkilezett monovalens fragmenseket alkalmazunk. 6. Bármelyik megelőző igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a B alegységet lúciferin-luciferáz reakcióval határozzuk meg, és az emittált fénymennyiséget kinetikusán mérjük. 7. Kreatinkináz-MB meghatározására szolgáló reagens, amely egy kreatinkináz-MB-t meghatározó rendszert és egy, a kreatinkináz M alegységét immunológiai úton kikapcsoló szert tartalmaz, azzal jellemezve, hogy az immunológiai úton kikapcsoló szer kreatinkináz-MM-el szembeni antitestek monovalens fragmenseiből áll. 1 ábraoldal A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 84.4434 - Zrínyi Nyomda, Budapest 5
