181600. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fagyasztott gombacsira és nagy fehérjetartalmú biomassza előállítására hulladékkenyér szubsztrátumon Agaricus campestris és Pleurotus ostreatus fermentorban való tenyésztésével
3 181600 4 Oltóanyag-készítési példák 1. példa Pleurotus ostreatus ferde agar tenyészetéről lemosott micélium-szuszpenzió 3—3 ml-ével beoltunk 300—300 ml táptalajt, amelyet 1000 ml-es Erlenmeyer lombikokban előzetesen autoklávban sterileztünk (120 °C, 40 perc). 1 liter táptalaj összetétele a következő: korpakivonat 900 ml kukoricaliszt 20 g kukoricalekvár 20 g nh4no3 6g kh2po4 1 g ZnS04 0,25 g MnS04 0,1 g MgS04 0,20 g CaCl2 • 2H20 0,30 g pH=5,0. A tenyészeteket rázógépen (330 ford, min 4, löket 20 mm) 26 °C-on inkubáljuk 48 óráig. A tenyészidő végén lefagyasztjuk és mélyhűtőben —15 °C-on tároljuk. 3 hónap múlva a tenyészetet kíméletesen (hideg vízben) felolvasztottuk, majd inokulumként használtuk fermentációhoz. A fagyasztott inokulummal oltott fermentáció micéliumhozama 17,2 g 1 A, fehérjehozama pedig 10,5 g 1 4 volt. 2. példa Ha az 1. példában leírt módon készített 48 órás fagyasztott Pleurotus ostreatus oltóanyagból friss 24 órás rázott inokulumot készítünk, a friss oltóanyaggal oltott fermentáció micélium-, illetve fehérjehozama 21,6, illetve 9,2 g 1 4 volt. 3. példa Ha az 1. példában leírt módon készítünk 24 órás fagyasztott Pleurotus ostreatus oltóanyagot és ebből friss 96 órás inokulumot készítünk. A 96 órás oltóanyaggal oltott fermentáció micélium-, illetve fehérjehozama 26,2, illetve 13,9 g 1 4, és a biomassza jellegzetesebb gomba-illattal rendelkezett, mint az egynapos, friss inokulum alkalmazása esetén. 4. példa Agaricus campestris ferde agárról lemosott micéliumszuszpenziójának 3—3 ml-ével 300—300 ml táptalajt oltunk be, amelyet előzetesen 1000 ml-es Erlenmeyer lombikokban autoklávban sterilezünk (120 °C, 40 min). Az inokulum táptalaj összetétele literenként a következő: kenyér 30 g kukoricalekvár 10 g szója 10g Ca(N03)2 6g kh2po4 1g ZnS04 0,25 g MnS04 0,1 g MgS04 0,2 g CaCl2 2H20 0,3 g, 1 literre kiegészítve, A tenyészeteket rázógépen (330 ford, min 4, löket 20 mm), 28 ”C-on inkubáljuk 24 óráig. A tenyészeteket ekkor lefagyasztjuk és — 15*C-on tároljuk. Használat előtt kíméletesen felolvasztjuk és oltóanyagként használjuk fermentációhoz. A 24 órás fagyasztott oltóanyaggal oltott fermentáció micéliumhozama 15,3, fehérjehozama pedig 8,9 g 1 4 volt. 5. példa Ha a fenti 24 órás fagyasztott inokulummal friss 24 órás inokulumot készítünk, a friss inokulummal oltott fermentáció micélium-, illetve fehérjehozama 12,4, illetve 7,91 g 1 4 volt. 6. példa A 4. példában leírt módon 48 órás fagyasztott Agaricus campestris oltóanyagot készítünk, és ezt a tenyészetet alkalmazzuk a fermentáció inokulumaként. A fermentáció során nyert micélium-, illetve fehérjehozam 12, illetve 6,27 g 1 4. Fermentációs példák 7. példa 10 liter tápközeget [amely 400 g száraz őrölt kenyeret, 60 g (NH4)2S04-et, 100 g kukoricalekvárt, 10 g KH2P04- ot, 2,5 g ZnS04-ot, 2 g MnS04-ot és 3 g CaCl2-ot tartalmaz; pH = 5,5] beoltunk 1 liter 96 órás Pleurotus ostreatus rázott inokulummal. A tenyészetet percenként 1 táptalajtérfogatnak megfelelő levegő átáramoltatásával levegőztetjük (keverés 460/perc), és 27 °C-on inkubáljuk. A tenyésztést 27 órás korban leállítjuk, szűrőcentrifugán elválasztjuk a micéliumot a tenyész-szűrlettől, majd a biomasszát levegőáramban megszárítjuk. A 10 liter fermentléből 212 g micéliumot, illetve 100 g fehérjét nyerünk. 8. példa 10 liter tápközeget [amely 300 g száraz őrölt kenyeret, 60 g Ca(N03)2-ot, 2 g MnS04-ot és 3 g CaCl2-ot tartalmaz; pH = 4,5] beoltunk 1 liter 24 órás Agaricus campestris rázott inokulummal. A tenyészetet percenként 1,5 táptalaj-térfogatnak megfelelő levegő átáramoltatásával levegőztetjük (keverés 460/perc). Inkubálás 27 °C-on történik 21 órán át. Ezután a micéliumot elválasztjuk a szűrlettől, majd levegőáramban megszárítjuk. A száraz biomassza-hozam 178g, a fehérjehozam pedig (a biomassza Kjeldahl-módszerrel meghatározott fehérjetartalmából számolva) 90 g. 9. példa 100 liter tápközeget [amely 4 kg száraz őrölt kenyeret, 600 g NH4N03-ot, 1 kg kukoricalekvárt, 100 g KH2P04- ot, 25 g ZnS04-ot, 20 g MnS04-ot és 30 g CaCl2-ot tartalmaz; pH = 5,0] beoltunk 10 liter 24 órás Pleurotus ostreatus inokulummal. Az inkubációs hőmérséklet 28 °C volt. A levegőztetés percenként 100 liter levegő átáramoltatásával tör-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
