181539. lajstromszámú szabadalom • Reagens lipázmeghatározáshoz és eljárás ennek előállítására
9 181539 10 9. példa 8,88 g mannitot, 0,86 g nátrium-dezoxikolátot, 0,1 g nátrium-azidot és 0,034 g kolipázt 100 ml desztillált vízben oldunk. Ebbe az oldatba keverés közben nyomás alatt befecskendezzük 2,5 g triolein 7 ml propanollal készített oldatát. Az így keletkező emulziót -40 °C-on megfagyasztjuk, és liofilizáljuk. 22,4 g mannitot, 4 g 4000 molekulasúlyú polietilénglikolt, 2 g karbamidot, 7,47 g nátrium-dezoxikolátot, 0,82 g nátrium-kloridot, 0,2 g nátrium-azidot, 2,71 g TRIS-t és 0,4 g TRIS-hidrokloridot megőrlünk, és bensőségesen összekeverünk egymással. Ehhez hozzáadjuk a felaprított szárazemulziót, és homogénre keverjük. 90 mg ilyen poralakú reagenst adunk 2 ml desztillált vízhez, és az oldódás után 100 pl mintával (szérum) elegyítjük. A reakciót 340 (365) nm-nél (Hg) fotometriásan követjük. A cseppnagyság eloszlását hőterheléssel és anélkül (lásd 2. példa) a 4. ábrán láthatjuk. 10. példa 1000 ml vízben feloldjuk az alábbiakat: 75 g mannit, 25 g 4000 molekulasúlyú polietilénglikol, 20 g taurodezoxikolát, 55 mmól 6,8 pH-jú HEPES-puffer, 0,3 g kalcium-klorid és 9 mg kolipáz. Ehhez az oldathoz 1 g oldott trioleint fecskendezünk (keverés közben). Ebből az emulzióból 1—1 ml-t töltünk fiolákba, és liofilizáljuk. A liofilizátumot 2,0 ml desztillált vízben oldjuk. A lipázmeghatározást 100 pl szérum hozzáadásával és 340 vagy 365 nm-nél történő fotometriás méréssel végezzük. A liofilizátum 4 °C-on és 35 °C-on 3 héten át való tárolása után kétszer desztillált vízben történő feloldásakor semmilyen eltérést nem állapítottunk meg a kezdeti extinkcióban és a kísérlet lefolyásában sem. A leírás során használt rövidítések: HEPES = 2-[4-(2-hidroxi-etil)-piperazin-l -ilj-etánszulfonsav; TAPS = N-trisz(hidroxi-metil)-metil-3-amino-propán-szulfonsav; TRIS =trisz(hidroxi-metil)-amino-metán. Szabadalmi igénypontok 1. Szubsztrátolajat, védőkolloidot, emulgeátort és aktivátort tartalmazó rekonstruálható olyan szárazreagens lipáz turbidimetriás meghatározására, amely víz hozzáadására emulziót képez, azzal jellemezve, hogy 0,2—10 súly% folyékony, 14—22 szénatomos zsírsavcsoportokat és 1—8 szén-szén kettős kötést tartalmazó trigliceridet, 20—90súly% védőkolloidot, előnyösen polietilén-glikolt, polivinil-pirrolidont, aminosavakat, oligoszacharidot vagy szérumalbumint, 5—60 súly% epesav-alkálifémsót, 0,001—0,1 súly% kolipázt, 5—20 súly% karbamidot, 3—50 súly% 6,0—10,5 pH tartására szolgáló pufieranyagot, 0,5—5 súly% alkálifém- vagy alkáliföldfémsó aktivátort és adott esetben 0,1—2,0 súly% tartósítószert tartalmaz. 2. Az 1. igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy 0,2—2,0 súly% trigliceridet tartalmaz. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy egy vagy több pohhidroxi-vegyületet tartalmaz védőkolloidként. 4. A 3. igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy polihidroxi-vegyületként molekulánként 1—4 pentóz-, illetve hexóz-egységből álló monomer vagy polimer pentózt vagy hexózt vagy/és valamilyen szilárd polietilénglikolt tartalmaz. 5. Bármelyik megelőző igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy 50—70 súly% védőkolloidot tartalmaz. 6. Bármelyik megelőző igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy 10—15 súly%epesavsót tartalmaz. 7. Bármelyik megelőző igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy 0,003—0,01 súly% kolipázt tartalmaz. 8. Bármelyik megelőző igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy tartósítószerként valamilyen alkálifém-azidot tartalmaz. 9. Bármelyik megelőző igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy 10—15 súly% karbamidot tartalmaz. 10. Bármelyik megelőző igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy 3—10 súly% pufieranyagot tartalmaz. 11. Bármelyik megelőző igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy pufferanyagként 2-[4-(2-hidroxi-etil)-piperazin-l-il]-etánszulfonsav puffert, vagy trisz(hidroxi-metil)-amino-metán puffert tartalmaz. 12. Bármelyik megelőző igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy aktivátorként nátrium-, kalcium- vagy magnézium-kloridot tartalmaz. 13. Eljárás az 1—12. igénypontok bármelyike szerinti szárazreagens előállítására, azzal jellemezve, hogy a 14—22 szénatomos zsírsavcsoportokat és 1—8 szén-szén kettős kötést tartalmazó trigliceridből vizes emulziót készítünk, amelyben epesavsót, kolipázt, legalább 10 súly% védőkolloidot, előnyösen polietilén-glikolt, polivinil-pirrolidont, aminosavakat, oligoszacharidokat vagy szérumalbumint és adott esetben alkálifém- vagy alkáliföldfémsó aktivátort és ha tartósítószert is alkalmazunk, annak legalább egy részét, keverünk össze, majd az emulziót liofilizáljuk, és a liofilizátumhoz pufieranyagot, karbamidot és adott esetben a maradék védőkolloidot és tartósítószert, valamint adott esetben további aktivátort keverünk hozzá. 14. A 13. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a védőkolloid, epesavsó, kolipáz és adott esetben tartósítószer és aktivátor oldatához keverés közben vékony sugárban hozzáfecskendezzük a triglicerid valamilyen illékony szerves oldószerrel készült oldatát. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 4 ábraoldal A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 84.5406.66-4 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkő István igazgató 5
