181505. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 21-hidroxi-20- metil-pregnán- származékok előállítására
5 181505 6 b) 65 ml le példában leírt táptalajt 5 ml Mycobacterium spec. NRRL B—3683 oltótenyészettel elegyítünk. Utána hozzáadunk a tenyészethez 28 ml-t az lb példában leírt szitoszterin-emulzióból, majd 24 óra elteltével 4 ml 4%-os nátrium-tetraborát oldatot, és további 120 órán át fermen- 5 táljuk. A fermentlevet az le példában leírtak szerint feldolgozzuk, és így 90 mg 21-hidroxi-20-metil-l,4-pregnadién-3- -ont kapunk, amelynek olvadáspontja 180—182 “C (etilacetát és aceton elegyéből kristályosítva). 6. példa 40 ml la példa szerint. készített Mycobacterium spec. NRRL B—3805 oltótenyészetet 4000 ford/percnél centrifugálunk. Az így kapott baktériumtömeget utána kétszer mossuk 0,5% nátrium-kloridot, 0,012% magnézium-szulfát-heptahidrátot és 1,36% kálium-dihidrogén-foszfátot tartalmazó 6 pH-ra pufferolt sóoldattal, utána 40 ml ilyen sóoldatban 20 szuszpendáljuk, és 10 ml 0,5%-os l-metil-3-nitro-l-nitrozo-guanidin oldattal elegyítjük. A baktériumszuszpenziót egy órán át 30 °C-on inkubáljuk, majd a baktériumokat lecentrifugáljuk, kétszer mossuk a fent említett sóoldattal, és vér-agar lemezeken (Oxoid Ltd., 25 London gyártmánya) szélesztjük. A képződő egÿsejt-telepekből kiválasztjuk azokat, amelyek kerek telepeket képeznek, és ezekből az la példában leírtak szerint oltótenyészeteket készítünk. Az oltótenyészetek felhasználásával az le példában leírtak szerint próbafermentációt végzünk. Az eredmények a következők: A vizsgált szelekciós törzsek száma 21 -Hidroxi-20-metil-4-pregnén-3-on kitermelése Nátrium-tetraborát hozzáadása nélkül Nátrium-tetraborát hozzáadásával 19 0—200 mg — 8 201—400 mg-------------94 401—600 mg — 35 601—800 mg — 7 801—1000 mg 1550—2100 mg 0 1001—1020 mg — 6 1021—1040 mg 1900—3000 mg 1 1041—1060 mg (150 mg) 2900 0 1061—1080 mg — ■ — 1 1081—2000 mg (195 mg) 3450 mg Szabadalmi igénypontok Eljárás az (I) általános képletű 21-hidroxi-20-metil-pregnán-származékok előállítására — ahol a képletben ■ jelentése egyes vagy kettős kötés — fermentációval zoo- vagy fitoszterinekböl Mycobacterium spec. NRRL B—3683 vagy NRRL B-3805 vagy ezek variánsainak és mutánsainak tenyészetével, azzal jellemezve, hogy a fermentációt 6,0—8,0 pH értéken borátionok vagy szerves bórve- 10 gyületek jelenlétében végezzük, emellett zoo- vagy fitoszterinként előnyösen (II) általános képletű vegyületet alkalmazunk, ahol------- jelentése egyes vagy kettős kötés; Y jelentése oxocsoport vagy hidrogénatom; 15 és R1 jelentése hidrogénatom, metil- vagy etil-csoport. 2. Az 1 igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy borátionokat szolgáltató szerként ortobórsavat, metabórsavat, polibórsavat, vagy ezek alkálifém- vagy alkáliföldfém-sóit használjuk. 3. Az 1 vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy szerves bórvegyületként trifenil-borátot használunk. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a Mycobacterium spec, tenyészethez literenként 1—5 g borátionokat szolgáltató szert adunk. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a borátionokat szolgáltató szert a fermentáció kezdete után 10—30 órával adjuk hozzá a tenyé-30 szethez. 1 db ábraoldal 35 40 45 50 55 A kiadásért felei a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 84.5403.66-4 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkő István igazgató
