181488. lajstromszámú szabadalom • Eljárás racém hidantoinok hidrlízisére optikailag aktív N-karbamoil -aminosav-származékokká és a hidrolizáló enzomkomplex előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS 181488 Nemzetközi osztályozás: Bejelentés napja: 1978. III. 14. (SA—3098) NSZO3 C 12 P 13/04; C 12 N 9/14 Elsőbbsége: 1977. III. 15. (21232 A/77 sz.) Olaszország Æÿ* *1! jS* ■*Jl ORSZÁGOS Közzététel napja: 1982. X. 28. TALÁLMÁNYI HIVATAL Megjelent: 1985. VIII. 31. p Feltalálók: Szabadalmas: 1 Viglia Aurelio, vegyész, Montcrotondo, ANIC S. p. A., L. Fascetti Eugenio, vegyész, Róma, Milánó, Olaszország Perricone Elena, vegyész, Róma, Degen Ludwig, vegyész, Róma, Olaszország Eljárás racém hidantoinok hidrolízisére optikailag aktív N-karbamoil-aminosav-származékokká és a hidrolizáló enzim-komplex előállítására ] A találmány tárgya racém hidantoinokat optikailag aktív N-karbamoil-aminosavakká alakító enzim-komplexek előállítására, cs eljárás hidantoinok hidrolízisére D-konfigurációjű N-karbamoil-aminosav-származékokká. A találmány értelmében a fenti hidrolízist úgy végezzük, hogy bizonyos mikroorganizmusok táptalajába induktorként hidantoinokat adagolunk, amikor azok hidropirimjdinhidrolázt (E. C. 3. 5. 2. 2.) termelnek. Néhány D-konfigurációjú aminosavat, különösen a fenilglicint és a hidroxi-fenilglicint fontos köztes vegyületként széleskörűen használja a gyógyszeripar. Számos kísérlet történt az optikai antipódok szétválasztására, ennek ellenére egyik módszer sem vált be ipari méretekben. Az optikai antipódok elválasztására használt kémiai módszer szerint optikailag aktív vegyületeket használnak, például kámfor-szulfonsavat, borkősavat és másokat. Ezen módszerek hátránya, hogy az átalakítás hatásfoka alacsony, és a költségek magasak. Más módszerek szerint egy D-acil-aminosavat az aciláz enzimmel szelektíve hidrolizálnak. Az acilázok azonban viszonylag ritka enzimek, és minden esetben L-acilázt is tartalmaznak. így ez a módszer, amellett, hogy bonyolult, nem biztosít megfelelő optikai tisztaságot. A találmány szerinti enzimes hidrolízissel egy racém vegyületből előállíthatjuk egy aminosav vagy egy aminosavszármazék tiszta sztereo-izomer alakját. A D,L-aminosavak vagy ezek származékainak enzimes szétválasztására vonatkozóan lásd a 170 211. sz. magyar, és 2 a 2 422 737. sz. NSZK-beli szabadalmi leírást, valamint a 26 31 048. sz. NSZK-beli nyilvánosságrahozatali iratot. A fentiekben ismertetett módszerek szerint úgy járnak el, hogy az (I) általános képletű vegyületek racém alakjait, ahol az (I) általános képletben X hidrogénatom, hidroxil- vagy metoxiesoport, borjúmájból extrahált hidropirimidin-hidrolázzal, vagy a Pseudomonas nemhez tartozó mikroorganizmusokkal termelt hidropirimidin-hidrolázzal enzimatikusan hidrolizálják. Ez a hidrolízis az A reakcióegyenlet szerint játszódik le, ahol X az előzőekben megadott jelentésű. Úgy találtuk, hogy az (I) általános képletű racém vegyületek A reakcióegyenlet szerinti enzimes elválasztás a Bacillus genus tartozó termőül mikroorganizmusok által termelt hidrolázokkal is elvégezhető. Ezen mikroorganizmusok által termelt hidrolázok hővel szemben ellenállók, így használhatók viszonylag magas, 40 C° és 60 C° közötti hőmérsékleten végzett hidrolízises reakcióknál. Ez lehetővé teszi, hogy nagyobb koncentrációjú hidantoin-oldatokkal végezhessük a reakciót, azaz csökkennek azok a hátrányok, amelyeket néhány hidantoin alacsony és átlagos hőmérsékleten való gyenge oldhatósága okoz. A találmány szerinti eljárás értelmében az enzimes hidrolízishez használt, a Bacillus genusba tartozó mikroorganizmusok sejtjeit levegőztetett körülmények között, nitrogén- és szénforrást, továbbá szervetlen sókat tartalmazó táptalajon 30 C° és 60 C°, előnyösen 40 C° és 60 C° közötti hőmérsékleten 10 óra és 48 óra, előnyösen 10 óra és 24 óra közötti időn át 6 és 8, előnyösen 7,4 és 7,8 közötti pH-n tenyésztjük. Szénforrásként peptont, húskivonatot, kukoricalekvárt, nitrogénforrásként nitrátokat, ammóniumsókat, húskivonato-5 10 15 20 25 30 181488
