181458. lajstromszámú szabadalom • Eljárás parazita ellenes C-076 vk 13-halogén- és 13-dezoxi-származékainak előállítására
21 181458 22 14. példa 13-Dezoxi-22,23-dihidro-C-076-B 1 b-aglükon elkülönítése 20 mg, 73% 13-dezoxi-22,23-dihidro-C-076-Bla-aglükont és 17% 13-dezoxi-22,23-dihidro-C-076-Blb-aglükont tartalmazó kiindulási anyagot feloldunk 200 pl metanolban, majd a kapott oldatból két 100 pl-es aliquotot a Whatman cég által Partisii M9 10/50 ODS-2 jelzéssel forgalmazott, fordított fázisú nagynyomású folyadékkromatográfiás oszlopon kromatografálunk, az eluálást szobahőmérsékleten 4,0 ml/perc sebességgel metanol és víz 9 : 1 térfogatarányú elegyével végezve. Az eluálást refraktometriásán követjük, és a 24,5 perc retenciós idejű 13-dezoxi-22,23-dihidro-C-076-Blb-aglükont három frakcióban különítjük el. A megfelelő frakciókat összeöntjük, majd nagynyomású folyadékkromatográfiásán elemezzük. Az első, 13-dezoxi-22,23-dihidro-C-076- -Blb-aglükonban erőteljesen feldúsult frakciót szárazra pároljuk, majd felvisszük egy 10cmx20cm méretű, 250 p vastag, szilikagél GF jelzésű vékonyrétegkromatográfiás lemezre.A futtatást háromszor metilén-kloriddal végezzük. A 0,30—0,37 R-értékü terméksávot lekaparjuk, majd 1—1 ml etil-acetáttal ötször eluáljuk. Az eluátumot vákuumban bepároljuk, majd a kapott maradékot benzolból liofilizáljuk. 0,6 mg terméket kapunk. IR-spektrum (tiszta film): 3600—3100 (m, OH), 1720 (s, C = 0) cm \ UV-spektrum (2,3 x 10 5 M, CHjOH): Xmax: 237 nm (e = 29 000) 244 nm( = 31000) 252 nm (váll, s = 25 000). Nagynyomású folyadékkromatográfiás elemzés eredményei: Vegyület A keverékben a %-os menynyiség Retenciós idő (perc) ismeretlen 18 8.2, 9,6, 10,6, 13,6, 15.2, 17,1 13-dezoxi-22,23-dihidro-C-076- -B1 b-aglükon 63 18,5 13-dezoxi-22,23-dihidro-C-076--Bla-aglükon 18 20,9 A 9—15. példákban, illetve a 7—9. referenciapéldákban említett nagynyomású folyadékkromatográfiás elemzéseket — ha csak másképpen nem jelezzük — 30 cm x 7,8 mm méretű, Waters p Bondapack C13 jelzésű oszlopon, az eluálást szobahőmérsékleten 1,5 ml/perc sebességgel metanol és víz 9 : 1 térfogatarányú elegyével végezve hajtjuk végre. Az eluátumot ibolyántúli fénnyel 254 nm-en vizsgáljuk, és a görbéket Spectraphysics SP4100 típusú integrátorral integráljuk. 7. referenciapélda 22,23-Dihidro-C-076-Bla és 22,23-dihidro-C-076-Blb előállítása 5,00 g, 86.6 mól% C-076-Bla és 13,4 mól% C-076-Blb tartalmú kiindulási anyag 164 ml benzollal készült oldalához 1,56 g trisz-(trifenil-foszfin)-ródium(l)-kloridot adunk, majd az így kapott keveréket szobahőmérsékleten 1,0 atm nyomású hidrogéngáz-atmoszférában 21 órán át keverjük. Ezután egy aliquotot 5 cm x 20 cm méretű, 250 p vastag, szilikagélből készült vékonyrétegkromatográfiás lemezen kromatografáljuk, futtatószerként kloroform és tetrahidrofurán 17:3 térfogatarányú elegyét használva. A 0,20—0,30 Rr-értékű sávot lekaparjuk, majd 2,0—2,0 ml etil-acetáttal háromszor mossuk. Az így kapott etil-acetátos oldat nagynyomású folyadékkromatográfiás elemzése azt mutatja, hogy mindössze 2% reagálatlan C-076-Bla-t és C-076-Blb-t tartalmaz. Minthogy további hidrogénezésre nincs szükség, az oldószert vákuumban lehajtjuk, majd a kapott barna színű szilárd maradékot metilén-klorid és etil-acetát 1 : 1 térfogatarányú elegyével eldörzsöljük. Ezután szűrést végzünk, majd a szűrletet felvisszük 298 g 0,210—0,062 mm szemcseméretü szilikagélből álló oszlopra. Az eluálást metilén-klorid és etil-acetát 1 : 1 térfogatarányú elegyével végezzük, 50 ml-es frakciókat szedve. A 17—66. frakciókat összeöntjük, majd vákuumban bepároljuk, halványsárga olajat kapva. Ezt azután 25 ml benzolból liofilizáljuk, 5,22 g mennyiségben halványsárga port kapva. IR-spektrum (tiszta film): 3650—3100 (s, OH), 1740 és 1710 (C = 0) cm UV-spektrum (3,0 x 10 ~5 M, CH3OH): X max: 229 nm (c = 25 000) 237 nm (e = 28 000) 244 nm (s = 29 000) 253 nm (váll, e = 2100). Nagynyomású folyadékkromatográfiás elemzés eredményei: Vegyület A keverékben a %-os menynyiség Retenciós idő (perc) ismeretlen 2 2,5 C-076-Bla és C-076-Blb 1 5,0 22,23-dihidro-C-076-Blb 12 6,1 22,23-dihidro-C-076-Bla 81 6,9 3,4,22,23-tetrahidro-C-076-B 1 - elegy 3 8,2 8. referenciapélda 22,23-Dihidro-C-076-B 1 b elkülönítése 210 mg, 81% 22,23-dihidro-C-076-B 1 a-t és 12% 22,23-dihidro-Blb-t tartalmazó kiindulási anyagot feloldunk 2,0 ml metilén-kloridban, majd a kapott oldatot egyenletesen felvisszük négy 20 cm x 20 cm méretű, 1000 p vastag, szilikagélből készült preparatív vékonyrétegkromatográfiás lemezre. A futtatást kloroform és tetrahidrofurán 9: 1 térfogatarányú elegyével kétszeresen végezzük. A 0,11—0,17 Rf-értékű részt a lemezekről lekaparjuk, majd 10—10 ml etilacetáttal ötször átmossuk. Az egyesített etil-acetátos mosófolyadékot vákuumban bepároljuk, majd az így kapott 36 mg színtelen üvegszerű anyagot 360 pl metanolban feloldjuk. A kapott oldatból 40 pl-es, 100 pl-es és mégegyszer 100 pl-es aliquotokat a Whatman cég által Partisii M9 10/50 ODS-2 jelzéssel forgalmazott, fordított fázisú nagynyomású folyadékkromatográfiás oszlopon kromatografálunk, az eluálást szobahőmérsékleten 4,0 ml/perc sebességgel metanol és víz 9 : 1 térfogatarányú elegyével végezve. Az eluálást refraktometriásán követjük és mindegyik aliquotnál a 23,9 perces retenciós idejű 22,23-dihidro-C-076-Blb-nek megfelelő csúcsot három frakcióban különítjük el. A megfelelő frakciókat az egyes kísérletekből kombináljuk egymással. Az 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 II
