181434. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív FR-900156 anyag előállítására
7 181434 8 mékek is használhatók. Adhatunk a táptalajhoz adott esetben ásványi sókat, például kalcium-karbonátot, nátriumvagy kálium-foszfátot, nátrium- vagy kálium-kloridot, magnézium-sókat, réz-sókat és másokat. Adott esetben, különösen, ha a táptalaj habzik, úgy habzásgátló szert, például folyékony paraffint, állati, növényi vagy ásványi olajat vagy szilikon olajat adagolunk. Az FR—900 156 vegyület nagy mennyiségben való előállítását előnyösen más antibiotikumok előállításánál használt süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között végezzük. Kis mennyiségű hatóanyag előállítására rázott tenyészetet vagy felületi tenyésztést használunk lombikban. Abban az esetben, ha a tenyésztést nagyméretű tartályokban végezzük, úgy a termelő fermentort előnyösen a mikroorganizmus vegetatív tenyészetével oltjuk, mivel ily módon elkerüljük az FR—900 156 vegyület termelésekor a növekedési lagot (növekedési szünet). Ily módon előnyösen úgy járunk el, hogy viszonylag kis térfogatú táptalajt beoltunk a mikroorganizmus spóráival vagy micéliumával, majd tenyésztést követően ezt a vegetatív oltóanyagot steril körülmények között beöntjük a termelő fermentorba. A vegetatív oltóanyag beoltására használt táptalaj az FR—900 156 vegyület termelésekor használt táptalajjal azonos, vagy attól különböző lehet. A táptalaj levegőztetését és keverését különböző úton végezhetjük. A keverés történhet hagyományos keverővei, vagy hasonló mechanikus működésű berendezéssel, a fermentor forgatásával vagy rázásával, különböző szivattyúkkal, vagy a steril levegő táptalajon való átvezetésével. A levegőztetésre steril levegőt vezetünk át a fermentációs táptalajon. A fermentációt általában 20 C° és 40 C° közötti, előnyösen 30 C° hőmérsékleten végezzük, 50 óra és 100 óra közötti időn át. Az FR—900 156 vegyületet a táptalajból ismert módszerekkel, más ismert antibiotikumok izolálásához hasonló módon nyerjük ki. A termelt FR—900 156 antibiotikum nagy része a táptalaj folyékony részében található meg, ily módon az a szűrletből különíthető el, amit viszont a táptalaj szűrésével vagy centrifugálásával kapunk meg. Ez az elkülönítés ismert módszerekkel történik, például csökkentett nyomáson való koncentrálással, fagyasztva szárítással, pH-beállítással, anionvagy kation-cserélő gyantával, nem ionos adszorpciós gyantával való kezdéssel, adszorbenssel, például aktivált szénnel, szilikagéllel, szilíciumsavval, cellulózzal, alumíniumoxiddal stb. való kezeléssel, kristályosítással, újra kristályosítással és más hasonlókkal. A fermentlében lévő FR—900 156 vegyületet szabad alakban izolálhatjuk, de izolálhatjuk megfelelő sójaként is, ha a feldolgozás során, például extrakciókor, elkülönítéskor vagy tisztításkor az FR—900 156 vegyületet tartalmazó oldatokhoz vagy sűrítményekhez bázist, például szervetlen bázist, mint például alkálifém-vegyületet, például nátrium-hidroxidot, nátrium-karbonátot, nátrium-bikarbonátot, kálium-hidroxidot stb., alkáli-földfém-vegyületet, például kalcium-hidroxidot, magnézium-hidroxidot stb., ammóniát és másokat, szerves bázist, például etanol-amint, trietil-amint, diciklo-hexil-amint stb., vagy például savat, mint például szervetlen savat, például hidrogén-kloridot, kénsavat, foszforsavat stb., szerves savat, mint például hangyasavat, ecetsavat, para-toluol-szulfonsavat, citromsavat, borkősavat stb. adunk. Az így előállított sókat könnyen átalakíthatjuk az FR— 900 156 szabad alakjává. A szabad alakként előállított FR—900 156 vegyületet bázissal vagy savval kezelve ismert módon megfelelő sókká alakíthatjuk át. A találmány oltalmi köréhez tartozik mind az FR— 900 156 vegyület szabad alakja, mind pedig sói. Az FR—900 156 jelű vegyület az alábbi fizikai és kémiai tulajdonságokkal rendelkezik (az alábbi adatokat a 3. példában megadottak szerint előállított vegyülettel kaptuk): 1. Alak és szín: fehér por. 2. Az anyag természete: amfoter. 3. Színreakciók: pozitív: ninhindrinnel, kálium-permanganáttal és kénsavval pozitív reakciót ad; negatív; negatív a Dragendorff-reakció és az Ehrlich-reakció. 4. Oldhatóság: vízben oldódik, metanolban gyengén, etanolban, acetonban, étil-acetátban, benzolban, hexánban és kloroformban nem oldódik. 5. A vegyület olvadáspontja: 143—148 C° hőmérsékleten bomlás közben olvad. 6. Specifikus forgatás: [a]”: —27,1° (konc.: 0,4, vízben). 7. Ultraibolya abszorpciós spektrum: végabszorpció. 8. Infravörös abszorpciós spektrum (kálium-bromid): 1050, 1130, 1235, 1340, 1400, 1450, 1535, 1660, 1735,2950, 2980, 3080, 3350 cm -1 9. Elemanalízis: a minőségi analízis adatai szerint az FR—900 156 vegyület az alábbi elemeket tartalmazza: szén, hidrogén, nitrogén és oxigén. 10. Vékonyrétegkromatográfia: Stacioner fázis Oldószerelegy Ráérték Eastman cellulóz* butanol, ecetsav és víz 4:1:2 arányú elegye 0,35 Szilikagél, 60% izo-propanol 0,65 Merck** és víz * kereskedelmi név, az Eastman Kodak Co. gyártmánya; ** kereskedelmi név, a Merck és Co. gyártmánya. 11. Molekulasúly: tömegspektrometriás (meződeszorpciós módszer): 519 (alapcsúcs: M = 520). 12. Mágneses magrezonancia spektrum: a spektrumot a mellékelt ábrán adjuk meg (oldószer: D20, standard TNSP). 13. Aminosav-analízis: Aminosav Mólarány Glicin 1,00 Glutaminsav 1,06 Alanin 1,04 a, e-diamino-pimelinsav 1,03 (a mólarányt a glicin 1,00-ra számítva adjuk meg). Tapasztalati képlet: C2H33N5O11 Az FR—900 156 vegyület tisztább mintájának (a 4. példában megadottak szerint előállított anyag) fizikai és ké-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
