180925. lajstromszámú szabadalom • Eljárás központi idegrendszerre ható TRH-analóg tripeptid-amidok előállítására
17 180 925 18 A maradék olaj állás közben kikristályosodik. Így 8,48 g (97%) BOC-Cha-OPFP-t kapunk, olvadáspont: 75—77 °C, Rí = 0,88. Elemzési eredmények a C20H24O4NF5 összegképlet (molekulasúly: 437,41) alapján: számított: C 54,92%, H 5,53%, N 3,20%, F 21,72%; talált: C 54,67%, H 5,66%, N 3,11%, F 21,43%. 2. lépés L-Ciklohexilalanil-L-prolin-amid-hidroklorid 2,28 g (20 mmól) H-Pro-NH2-ot és 4,37 g (10 mmól) BOC-Cha-OPFP-t feloldunk 40 ml DMFA-ban, és az oldatot 5 perc állás után vákuumban bepároljuk. A maradék olajat 80 ml kloroformban feloldjuk, és az oldatot háromszor 20 ml n sósav-oldattal, háromszor 20 ml n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 20 ml vízzel kirázzuk, majd vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk. A kloroformos oldatot bepároljuk, a maradék olajat feloldjuk 8 ml etilacetátban, és 10 ml 5 n sósavas etilacetátot öntünk hozzá- 1 óra elteltével a reakcióelegyet éterrel hígítjuk, a csapadékot kiszűrjük, és vákuumban, vízmentes nátrium-hidroxid felett szárítjuk. Így 2,98 g (BOC-Cha-OPFP-re számítva 97%) H-Cha-Pro-NH2 • HCl-ot kapunk, Rf4 = 0,33. 3. lépés Benziloxikarbonil-L-piroglutamil-L-ciklohexil-alanil-L-prolin-amid 2,43 g (8 mmól) H-Cha-Pro-NH2 • HCl-ot és 3,60 g (8,4 mmól) Z-Glp-OPFP-t 25 ml DMFA- ban feloldunk, és az oldathoz 1,12 ml (8 mmól) trietilamint adunk. 5 perc múlva a reakcióelegyhez újabb 1,12 ml (8 mmól) trietilamint adunk, majd további 20 perc keverés után vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot feloldjuk 80 ml kloroformban, és az oldatot háromszor 20 ml n sósav-oldattal háromszor 20 ml n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 20 ml vízzel kirázzuk, majd vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk. A kloroformos oldatot bepároljuk, és a maradék olajat éterrel kristályosítjuk. A 3,88 g nyers terméket 30 ml etilacetátból átkristályosítjuk. Így 3,32 g (81%) Z-Glp-Cha- Pro-NH2-ot kapunk, olvadáspont: 165—166 °C, Rf2 = 0,17, [a] ^ = —67,3° (c = 1, ecetsavban). Elemzési eredmények a C^HioOeN/, összegképlet (molekulasúly: 512,61) alapján: számított: C 63,26%, H 7,08%, N 10,93%; talált: C 63,15%, H 7,04%, N 10,91%. 4. lépés L-Piroglutamil-L-ciklohexilalanil-L-prolinamid 3,07 g (6 mmól) Z-Glp-Cha-Pro-NH2-ot feloldunk 60 ml etanolban, és az oldaton, 0,6 g 10%-os csontszenes palládium-katalizátor hozzáadásával 2 órán keresztül hidrogéngázt buborékoltatunk át. A katalizátor kiszűrése után a szürletet bepároljuk, és a maradékot éterrel eldörzsöljük. 2,15 g (95%) amorf, szilárd Glp-Cha- Pro-NH2-ot kapunk, R4 = 0,50, [a] £1 = —70,9° (c = 1, ecetsavban). 10. példa L-Piroglutamil-L-treonil-L-prolin-amid 1. lépés O-Benzil-L-treonil-L-prolin-amid-hidroklorid 1,43 g (12,5 mmól) H-Pro-NH2-ot és 2,98 g (6,27 mmól) BOC-Thr(Bzl)-OPFP-t feloldunk 20 mi DMFA-ban, és az oldatot 5 perc állás után vákuumban bepároljuk. A maradék olajat 30 ml kloroformban feloldjuk, és az oldatot kétszer 10 ml n sósavoldattal, háromszor 10 ml n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal kirázzuk, majd vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk. A kloroformos oldatot bepároljuk, a maradék olajat 4 ml etilacetátban feloldjuk, és 5 ml 5 n sósavas etilacetátot öntünk hozzá. 1 órai állás után a reakcióelegyet éterrel hígítjuk, a csapadékot kiszűrjük, vákuumban, vízmentes nátrium-hidroxid felett szárítjuk- így 2,05 g (95%) nedvszívó H-Thr(Bzl)-Pro-NH2-HCl-ot kapunk, = 0,40. 2. lépés Benziloxikarbonil-L-piroglutamil-L-O-benziltreonil-L-prolin-amid 2,05 g (6 mmól) H-Thr(Bzl)-Pro-NH2 ■ HCl-ot és 2,69 g (6,27 mmól) Z-Glp-OPFP-t feloldunk 20 ml DMFA-ban, és az oldathoz 0,84 ml (6 mmól) trietilamint csepegtetünk. 5 perc múlva a reakcióelegyhez újabb 0,84 ml (6 mmól) trietilamint adunk, majd további 20 perc keverés után vákuumban bepároljuk. A maradékot feloldjuk 50 ml kloroformban, és az oldatot kétszer 10 ml n sósav-oldattal és háromszor 10 ml n nátriumhidrogén-karbonát-oldattal kirázzuk, majd vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk. Az oldatot bepároljuk, a maradék olaj éter alatt, hidegen megszilárdul. A nyers termék 2,76 g amorf, szilárd anyag, amelyet etilacetátban oldva megderítünk, bepárlás után a szilárd, amorf felhabzó maradékot éterrel eldörzsöljük. Így 2,47 g (75%) Z-Glp-Thr(Bzl)-Pro-NH2-ot kapunk. 3. lépés L-Piroglutamil-L-treonil-L-prolin-amid 2,04 g (3,7 mmól) Z-Glp-Thr(Bzl)-Pro-NH2-ot feloldunk 40 ml ecetsavban, és az oldaton, 0,4 g 10%-os csontszenes palládium-katalizátor hozzáadásával 4 órán keresztül hidrogéngázt buborékoltatunk át. A katalizátor kiszűrése után a szürletet bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük. Az 1,31 g amorf nyers terméket 30 g 0,063—0,2 mm-es szemcseméretű szilikagélt tartalmazó oszlopra visszük fel, és a 3. oldószereleggyel eluáljuk. A tiszta anyagot tartalmazó, összegyűjtött főfrakcióból bepárlás után a terméket éterrel izoláljuk. Így 0,72 g (59,5%) Glp- Thr-Pro-NH2-ot kapunk. R4 = 0,16, [a]n = —90,0° (c = 1, ecetsavban), aminosav-analízis: Glu 1,00 (1,0); Thr 0,99 (1,0); Pro 1,03 (1,0). -5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
