180787. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cisztein-tartalmú peptidek előállítására

21

180787

22

bs) Ddz-Gly-Ile-VaI-Glu(OBu')-Gln-OH

19,16 g (20 millimól) Ddz-Gly-Ile-Val-Glu(OBu’)-Gln-ONb-t feloldunk 100 ml dimetil-formamid és 100 ml metanol elegyében. Az oldathoz 10%-os bárium-szulfátra lecsapott palládium-katalizátort adunk, majd katalitikusán hidrogénezzük. 6 óra múlva befejeződik a hidrogénezés. A szuszpenziót felhevítjük mintegy 70 C° hőmérsékletre és a katalizátort melegen szűrjük és meleg dimetil-formamiddal mossuk. A szűrletet bepároljuk és a maradékot 100 ml metanollal eldörzsöljük, majd éjszakán át hűtőszekrényben állni hagyjuk, leszívatjuk és hideg metanollal mossuk. Vákuumban, foszfor-pentoxid fölött szárítjuk. Kitermelés: 14 g (85%). Op: 238—241 C° (bomlás közben). [a]f( = - 13,3° (c = 1, dimetil-formamidban).

Elem-analízis a C19Hf,2Nfl013 összegképlet alapján (molekulasúly: 822,97):

számított: C = 56,92%; H = 7,59%; N = 10,21%; talált: C = 56,0 %; H = 7,6 %; N = 10,8 %.

b9) Ddz-Gly-Ile-Val-Glu(OBu')-Gln-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Thr(Bu')-Ser(Bú)-Ile-Cys(Trt)-Scr-Leu-Tyr(Bú)-Gln-Leu-Glu(OBu')-Asn-Tyr(Bu’)-Cys(Trt)-Asn-OBu1

3,28 g (1 millimól) H-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Thr(Bu')-Scr(Bu'HIe-CysCrrtj-Ser-Leu-TyrjBu'j-Gln-Leu-GlulOBu')-Asn-Tyr(Bu')-Cys(Trt)-Asn-OBu‘-trifluor-acetátot, 1 g (mintegy 1,2 millimól) Ddz-Gly-Ile-Val-Glu(OBu‘)-Gln-OH-t és 162 mg (1,2 millimól) HOBt-t feloldunk 20 ml 1 : 1 arányú dimetil-formamid — dimetil-acetamid-elegyben, majd hozzáadunk 0,13 ml N-etil-morfolint és 0C° hőmérsékleten 310 ml (1,5 millimól) DCC-t. A reakcióelegyet 1 órán keresztül 0 C° hőmérsékleten és 6 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd éjszakán át állni hagyjuk. Sűrű gélszerű anyag keletkezik, amihez jeges vizet adunk. A keletkező csapadékot leszívatjuk és egymás után a következő oldatokkal dörzsöljük el: nátrium-hidrogén-karbonát-oldat, pH = 3-as citrát-pufifer-oldat, nátrium-hidrogén-karbonát-oldat és víz, közben mindig leszívatjuk. Végül vízzel mossuk és foszfor-pentoxid fölött szárítjuk. További tisztítás céljából kétszer kifőzzük 25—25 ml etil-acetáttal és mindkét esetben forrón leszívatjuk. Kitermelés: 2,87 g

(72%). Op: 260—278 C° (bomlás közben). [a]o = — 24,5° (c = 1, dimetil-formamidban).

Aminosav-analízis a C215H281N25O39S4 összegképlet alapján (molekulasúly: 3968,07):

számíAsp

Thr

Ser

Glu

Gly

Cys

Val

Ile

Leu

Tyr

tott:

2

1

2

4

1

4

1

2

2

2

talált:

2,06

0,88

2,04

3,97

1,01

2,59

0,60

1,45

1,93

1,93

b 10) H-Gly-Ue-Val-Glu(OBu')-Gln-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Thr-(Bu')-Ser(Bu')-Ile-Cys(Trt)-Ser-Leu-Tyr(Bul)-Gln-Leu-GlujOBu'j-Asn-TyríBu'j-CysCTrtj-Asn-OBu’-trifluor-acetát

2,78 g (0,7 millimól) Ddz-G!y-Ile-Val-Glu(OBu')-Gln-Cys(T rt)-Cys(T rt)-Thr(Bu')-Ser(Bu‘)-Ile-Cys(T rt)-Ser-Leu-TyrjBu'j-Gln-Leu-GIufOBu'j-Asn-TyríBu'j-CysfrrtJ-Asn-OBu‘-t 2,5 ml anizollal és 25 ml 5%-os, 1% vizet tartalmazó metilén-kloridos trifluor-ecetsav-oldattal ( = mintegy 14 millimól trifluor-ecetsav) szobahőmérsékleten 4 órán keresztül keverünk. A reakcióelegyhez ezután 1,4 ml piridint adunk, majd először vízsugár-szivattyú segítségével, majd nagyvákuumban bepároljuk. A maradékot eldörzsöljük éterrel, leszívatjuk, éterrel mossuk és szárítjuk. A terméket ezután vízzel dörzsöljük el, leszívatjuk, vízzel mossuk és foszforpentoxid fölött szárítjuk. További tisztítás céljából kétszer felfőzzük 50—50 ml etil-acetáttal és mindkét esetben forrón leszívatjuk. Kitermelés: 1,85 g (68,5%). Op: 275—280C° (bomlás közben), [ajg1 = -24,0° (c=l, dimetil-formamidban).

Aminosav-analízis a C203H2e7N25O35S4 • CF3COOH öszszegképlet alapján (molekulasúly: 3859,8):

számíAsp

Thr

Ser

Glu

Gly

Cys

Val

Ile

Leu

Tyr

tott:

2

1

2

4

1

4

1

2

2

2

talált:

2,05

1,08

1,80

4,00

0,97

2,40

0,71

1,51

2,06

1,88.

Szabadalmi igénypont

Eljárás cisztein-tartalmú peptidek előállítására, az S-tritilcsoport trifluor-ecetsavas lehasításával, azzal jellemezve, hogy e peptidek S-tritil-származékait valamilyen alifás vagy aromás merkaptán és trifluor-ecetsav elegyével kezeljük, amikor is a trifluor-ecetsav-koncentráció legalább 30 térf%.

10

15

20

25

30

35

40

45

A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója

84.1278.66-4 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkő István igazgató