180783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás timozinÓ1(inex lent) és/Asn2(index fölt)/-analógjai előállítására
3 180783 4 benzhidriloxikarbonil-csoport, izobomiloxikarbonil-csoport, dinitro-difenil-metoxikarbonil-csoport, terc-butoxikarbonil csoport, terc-amiloxikarbonil-csoport, adamantiloxikarbonilcsoport, ciklopentiloxikarbonil-csoport, metil-ciklobutiloxikarbonil-csoport, metil-ciklohexiloxikarbonil-csoport, 2-arilizopropoxikarbonil-csoportok [így 2-(p-bifenilil)-izopropoxikarbonil- és 2-(4-piridil)-izopropoxikarbonil-csoport] és hasonló nitrogéntartalmú uretán-csoportok; acil-csoportok, így formil-, trifluoracetil-, ftaloil-, benzolszulfonil-, acetoacetil-, klóracetil-, 2-nitro-benzoil- és 4-toluolszulfonil-csoport; szulfenil-csoportok, így benzolszulfenil-, o-nitro-fenilszulfenil- és hasonló szulfenil-csoportok; továbbá aril-rövidszénláncú alkil-csoportok, így difenilmetil- és trifenilmetil-csoport. R5 előnyösen benziloxikarbonil-csoportot jelenthet. Az (I) általános képletű védett oktakozapeptidek védőcsoportjait önmagukban ismert módszerekkel hasíthatjuk le; így például ezeket a vegyületeket vízmentes savval (például hidrogénfluoriddal) kezelhetjük, célszerűen anizol jelenlétében. Az (I) általános képletű védett oktakozapeptideket a találmány értelmében úgy állíthatjuk elő, hogy a (II) általános képletű védett tetradekapeptideket H3C-CO-Ser(R‘)-X-Ala-Ala-Val-Asp(OR2)-Thr(R 3)-Ser(R1 )-Ser(R1 )-GIu(0R4)-Ile- (II) -Thr(R3)-Thr(R3)-Lys(R5)-OR? (IÍI) általános képletű védett tetradekapeptidekkel kondenzáljuk H-Asp(OR2)-Leu-Lys(R5)-Glu(OR4)-Lys(R5)-Lys(R 5)-Glu(OR4)-V al-V al-Glu(OR4)- (III)-Glu(OR4)-Ala-Glu(OR4)-Asn-OR15 — ahol X, R1, R2, R3, R4, R5 és R6 jelentése a fenti, és R1 hidrogénatomot vagy aktiváló csoportot jelent. A fenti kapcsolási reakciót az oldatfázisú peptid-szintézis jól ismert módszereivel hajthatjuk végre. Eljárhatunk például úgy, hogy a terminális amino-csoportot hordozó tetradekapeptidet 1-hidroxi-benztríazollal (HOBT) és diciklohexilkarbodiimiddel (DCC) reagáltatjuk, és az így kapott aktivált észtert kapcsoljuk a terminális karboxil-csoportot hordozó tetradekapeptiddel. A védett tetradekapeptideket önmagukban ismert módszerekkel állíthatjuk elő. Az X helyén Asp(OBzl) csoportot tartalmazó (III) általános képletű, karboxil-végcsoportot tartalmazó védett tetradekapeptidet például a következőképpen alakítjuk ki: A szintézis első lépésében H-Glu(OBzl)-OH-t Boc-Ala-OSu-val kapcsolunk, majd a kapott, Boc-Ala-Glu(OBzl)-OH képletű védett dipeptid-fragmenst a DCC[HOSu módszer szerint (lásd Wünsch és Drees: Chem. Ber. 99, 110/1966)] HCl • H-Asn-OBzl-el kondenzáljuk. Az aszparaginsav-benzilészter-hídroklorídot Boc-ASn-OBzl-böl állítjuk elő; ezt az utóbbi vegyületet a kereskedelemben kapható Boc- Asn-OH céziumsója és benzilbromid kondenzációjával alakítjuk ki. A Boc védőcsoport lehasítása során a védett vegyületet vízmentes tetrahidrofuránban 30 percig 4 n sósavoldattal kezeljük. Ezután H-Glu(OBzl)-OH és Boc-Glu(OBzl)-OSu reakciójával Boc-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-OH-t állítunk elő átlátszó, színtelen olaj formájában. A kapott vegyületet DCC/HOSu közvetítésével végrehajtott fragmens-kondenzációban HC1 • H-Ala-Glu(OBzl)-Asn-OBzl-e! reagáltatjuk (az utóbbi reagenst Boc-Ala-Glu(OBzl)-Asn-OBzl-ből állítjuk elő, tetrahidrofurános közegben 4 n sósavoldattal végzett kezeléssel). A kondenzáció során tiszta, kristályos anyag formájában jó hozammal kapjuk a Boc-Glu(OBzl)-Glu(OBzi)-AIa-Glu(OBzl)-Asn-OBzl képletű védett pentapeptidet. z A Boc-Glu(OBzl)-VaI-VaI-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asn-OBzl képletű védett oktapeptid szintézise során először a reagensként felhasználandó, Boc-Glu(OBzl)-Val~ -Val-OH képletű védett tripeptidet állítjuk elő. A védett tripeptid előállításának első lépésében Boc-Val-OSu-t szabad valinnal reagáltatunk, a kapott Boc-Val-Val-OH képletű termék védőcsoportját tetrahidrofurános közegben 4 n sósavoldattal lehasítjuk, majd a védőcsoportmentes terméket Boc-Glu(OBzl)-OSu-val reagáltatjuk. Ekkor a kívánt tripeptidhez jutunk, amelyet kristályos ciklohexilaminsója [Boc- Glu(OBzl)-Val-Val-OH • CHA] formájában különítünk el. A ciklohexilaminsóból felszabadítjuk a savat, majd a szabad savat HOSu jelenlétében, DCC felhasználásával HC1 ■ H-Glu(OBzl)-GIu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asn-OBzI-hez kapcsoljuk. Ezt az utóbbi reagenst Boc-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asn-OBzl tetrahidrofurános közegben végzett sósavas kezelésével alakítjuk ki. A kapcsolási reakcióban kialakult, Boc-Glu(OBzl)-Val-Val-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asn-OBzl képletű védett oktapeptidet tisztítás után amorf, szilárd anyag formájában különítjük el. A védett oktapeptid védőcsoportjait hidrogenolízissel és azt követő trifluorecetsavas kezeléssel ismert módon lehasítjuk, és a képződött Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn képletű szabad oktapeptidet ioncserés oszlopkromatográfiával tisztítjuk. Vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat és papír-elektroforézis szerint egységes terméket kapunk. A következő müveletsorozatban a Boc-GIu(OBzl)-Lys(Z)-Lys(Z)-Glu(OBzl)-Val-Val-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asn-OBzl képletű védett undekapeptidet alakítjuk ki. A szintézis első lépésében Boc-Lys (Z)-OSu és H-Lys(Z)-OH reakciójával Boc-Lys(Z)-Lys(Z)-OH-t állítunk elő, majd ezt a dipeptidet tetrahidrofuránban 4 n sósavoldattal kezeljük. A képződött HC1 • H-Lys(Z)-Lys(Z)-OH-t Boc-Glu(OBzl)-OSu-val reagáltatjuk, majd a kapott Boc-Glu(OBzl)-Lys(Z)-Lys(Z)-OH képletű tripeptidet Weygand és munkatársai módszerével [Z. Naturforsch. 21b, 426 (1966)] DCC/HOSu eleggyel aktiváljuk. A kialakult, Boc-GIu(OBzl)-Lys(Z)-Lys(Z)-OSu képletű aktív tripeptid-észtert magában a képződési reakcióelegyben H-Glu(OBzl)-Val-Val-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asn-OBzl trifluoracetát-sójával reagáltatjuk (ezt a reagenst a megfelelő, védett oktapeptid és trifluorecetsav 30 perces reakciójával alakítjuk ki). A reakcíóelegyhez kis mennyiségű bázist adunk. Termékként Boc-Glu(OBzl)-Lys(Z)-Lys(Z)-Glu(OBzl)-Val-Val-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asn-OBzl képletű védett undekapeptidet kapunk. A kapott védett undekapeptid védőcsoportjait vízmentes hidrogénfluoriddal végzett kezeléssel hasíthatjuk le. A képződött, Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn képletű szabad undekapeptid ioncserés oszlopkromatográfiás tisztítás után papír-elektroforézis szerint egységes termék. A szintézis végső műveletsorozatában a kívánt védett tetradekapeptidet alakítjuk ki a fentihez hasonló módszerrel. Boc-Leu-OSu és H-Lys(Z)-OH kapcsolásával Boc-Leu-Lys(Z)-OH-t állítunk elő. A kapott vegyület N“-Boc-csoportját tetrahidrofurános közegben 4 n sósavoldattal végzett kezeléssel lehasítjuk, és az így kapott vegyületet Boc-Asp(OBzl)-OSu-val reagáltatjuk. Tiszta, kristályos szilárd anyagként Boc-Asp(OBz!)-Leu-Lys(Z)-OH képletű védett tripeptidet kapunk. Ezt a vegyületet Boc-Asp(OBzl)-Leu-Lys(Z)-OSu képletű aktív észterévé alakítjuk, majd az aktív észtert H-Glu(OBzl)-Lys(Z)-Lys(Z)-Glu(OBzl)-Val-Val-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asn-OBzl trifluoracetát-sójával (a megfelelő védett undekapeptid és trifluorecetsav reakciójá-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
