180746. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-21978 jelű antibiotikum előállítására
21 18074(1 22 tok 50%-át védi meg a fertőzéstől (lásd Wick és munkatársai, J. Bacteriol., 81, 233—235,1961). Az A—21978C keverék és az A—21978C Ch C2, C3, C0, C4 és C5 komponensek EDJ0-értékeit a 15. táblázatban adjuk meg. 15. táblázat Az in vitro és in vivo aktivitás összehasonlítása Antibiotikum Staphylococcus aureus Streptococcus pyogenes MIC1 ed50! MIC ed50! ed50> A—21978C, 0,5 0,22 0,13 0,064 93 A—21978C2 0,13 0,16 0,13 0,032 59 A—21978C, 0,06 0,08 0,06 0,032 66 A—21978C0 0,25 0,16 A—21978C4 0,13 0,10 A—21978CS 0,06 0,053 A—21978 keverék 0,13 0,18 <0,03 0,043 Eritromicin 0,13 0,5 0,13 0,64 Streptococcus pneumoniae MIC EDV A—21978C) 0,13 0,3 A—21978C2 0,13 0,14 A—21978C, 0,03 0,09 A—21978C0 0,5 0,88 A—21978Q 0,5 0,36 A—21978Ç5 0,06 0,17 A—21978 keverék 0,13 0,1 Eritromicin 0,5 7,3 1 MIC=legkisebb agar-hígítással mért és u.g/ml-ben megadott növekedésgátló koncentráció. 2 Subkután adva. 3 Orálisan adva. A találmány fontos eredménye, hogy az A—21978C komponensek és az A—21978C keverék hatásos a pielonefritisz kezelésekor. Például a patkányokban kiváltott kísérleti polinefritisz fertőzést az A—21978C komponensek a vankomicinnél hatásosabban kivédik. A vizsgálat során baktériumtenyészetként Streptococcus faecalis-t (Guze) használtunk. A tenyészetet Tryticase szója-agaron (BBL) növesztjük, majd a sejteket infúziós táptalajba (BBL; brain heart infúziós táptalaj) szuszpendáljuk, a szuszpenziót 0,2 ml-es adagokra osztjuk és folyékony nitrogénban fagyasztjuk. A patkányok oltására naponta úgy készítünk baktérium szuszpenziót, hogy egy fagyasztott ampullából 50 ml Trypticase szójás, folyékony halmazállapotú táptalajt oltunk és a tenyészetet rázógépen, 37 C° hőmérsékleten egy éjszakán át növesztjük. Ezután hígítással milliliterenként 5 x 108 telepképző egységet tartalmazó szuszpenziót készítünk a S. faecalis tenyészetből. A vizsgált vegyületeket naponta egyszer, szubkután adagoljuk, hét napon át. A vizsgált vegyületeket 0,125%-os karboxi-metil-cellulóz készítményben szuszpendáljuk. À patkányok kísérleti fertőzését az alábbi eljárás szerint végeztük. Hím, véletlenszerűen kiválasztott albínó (Cox-Wistar), 190—210 g súlyú patkányokat 12 mg szükség szerint kiegészített nátrium-metoxi-hexitál intraperitoneális injekcióval elaltatjuk. A kísérleti pielonefritiszt Guze és Beeson szerint úgy váltottuk ki, hogy a bal oldali urétert 20 percen át lezártuk, majd a femorális vénába 0,5 ml, tesztorganizmust tartalmazó szuszpenziót injektáltunk. Az antimikrobális terápiát a fertőzést követő 4—5. órában kezdjük. Az utolsó kezelést követő 4. órában leöljük az állatokat, a bal oldali vesét eltávolítjuk és 9 ml fiziológiás sóoldatot tartalmazó Duall homogénizálóban homogenizáljuk. Ez a veseszövet 10_I hígítást jelenti. További tízszeres hígítást végzünk a sóoldattal, mivel a szövethomogenizátumban ennek megfelelő mennyiségű baktériumsejt rázható. Végül további hígítások után petricsészébe kiöntött agaron párhuzamos szélesztéseket végzünk, a tenyészeteket pedig egy éjszakán át 37 C° hőmérsékleten inkubáljuk. A terápiás hatást kétféleképpen adjuk meg; 1. azoknak a patkányoknak a %-ban megadott száma, amelyek veséjében 1 g-ra számítva kevesebb mint 100 baktérium van; ezek a „kúrált” állatok; 2. azoknak a patkányoknak a %-ban megadott száma, amelyek veséjében a fertőzött kontrolihoz képest a baktériumliter legalább log(0 4-szeresére csökkent. A kontroll állatokat csak 0,125%-os karboxi-metil-cellulózzal kezeljük. A kontroll patkányok 1 g-nyi veseszövet homogenizátumában 1,2 xlO8—4,6 xlO8 S. faecalis van. A vizsgálatok eredményeit a 16. táblázatban adjuk meg. 16. táblázat Streptococcus faecalis mikroorganizmus okozta patkány pielonefritisz vizsgálat Vizsgált antibiotikum MIC1 ^g/ml Patkány dózis* mg/kg X 7 log 4 Litercsökkenést mutató patkányok, %-a A kúrált patkányok, %-a Vankomicin 1,0 12,0 55 33 A—21978C) 1,0 1,0 50 50 A—21978C2 0,25 1,0 100 89 A—21978C3 0,13 1.0 78 78 A—21978C komplex 0,25 1,0 89 89 1 A S. faecalis Guze törzs in vitro érzékenysége. 2 Szubkután adagolva. A 17. táblázatban összefoglaljuk a major A—21978C komponensek és az A—21978C keverék toxicitási adatait. 17. táblázat Az A—21978C toxicitása LD50 (mg/kg) A 2I978C Egér Patkány TV. ‘ tv. Se. C[ komponens >250 >365 479 +32 C2 komponens 150—250 175 204 ± 17 C3 komponens <50 70—75. <160 Keverék 150 175—190 16.9 ± 10 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
