180723. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fáldalomcsillapító hatású pentapeptid-származékok előállítására
17 180723 18 tál, vízzel, hideg, 0,75 normál citromsav-oldaua! és végül megint vízzel mossuk a butanolos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton rhegszárítjuk, majd csökkentett nyomáson ledesktilláljuk a2 oldószert. Forró etanolban feloldjuk a maradékot, majd etil-acetát hozzáadásával kicsapjuk a terhiéket. Ily módon 1,1 g-nyi mennyiségben, 42%-os össztermeléssel nyerjük a kívánt vegyületet. Az aminosav-analizis talált értékei: alanin: 1,01: glicin: 1,01: fenil-alanin : 1,01: metionin: 0,98. E) N’-Tercier-butoxi-karbonil-L-tiroziND-alanil-glicil-L-fenil-alanil-L-rrtetionil-amid 20 nil jégecet, 2 ml anizol és 2 ml trietil-szilán elegyéhez hbzzáadunk 1,0 g (0,0019 mól), a D) pontban leírt módon nÿért terméket. Utána félórán át egy gázbevezető csövön keresztül vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe, majd dietil-étert adunk hozzá. Kiszűrjük és megszárítjuk a kivált csápádékot (0,870 g). 20 ml hideg (0 C’ hőmérsékletű) dimetil-formamid és 0,38 ml (0,0019 mól) diciklohexil-amin elegyében feloldjuk az ily módon nyert szilárd anyagöt, és 10 perc elteltével hozzáadunk 0,534 g (0,0019 mól) N’-tercier-butoxi-karbonil-L-tiroziht, 0,257 g (0,0019 mól) I-hidroxi-benzotriazolt, és végül 0,391 g (0,0019 mól) N,N'-diciklohexiI-karbodiimidet. 2 órán át 0 C° hőmérsékleten, majd 24 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük az elegyet. Utána ismét 0 C° Hőmérsékletre hűtjük, kiszűrjük a csapadékot, és a szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. n-Butanolban feloldjuk a maradékot, és egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, hideg, 0,75 normál citromsav-oldatlal és végül megint vízzel mossuk a butanolos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. A maradék etil-acetátos és etanolos kristályosítási próbái gélszerű anyaghoz vezetnek. Forró metanolban feloldjuk a desztillációs maradékot, és egy vastag rétegre vesszük fel az oldatot. Kloroform és metanol 9 : 1 arányú elegyével futtatjuk a réteget, majd lekaparjuk a lemezről a terméket tartalmazó adszorbenst, és kloroform és metanol elegyével kivonatoljuk. Csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószereket, ily módon 0,270 g-nyi (21%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, Rf== = 0,17. Az aminosav-analizis talált értékei: tirozin: 1,00; alanin: 1,02: glicin : 0,99; fenil-alanin : 1,02; metionin : 0,98. F) L-Tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-L-metioníl-amid-hidroklorid 5 ml jégecet és 0,25 ml anizol elegyéhez hozzáadunk 0,270 g (0,0004 mól), az E) pontban leirt módon nyert terméket. 20 percen át egy gázelosztó csövön keresztül vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe, majd megfagyasztjuk, és fagyasztva szárítjuk. Ily módon 0,182 gnyi (75%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, Rf = 0,5. Az aminosav-analizis talált értékei: tirozin: 0,99; alanin: 1,00; glicin: 0,99; fenil-alanin: 1,01; metionin: 0,91*. * Az analízis szerint metionin-szulfoxid van jelen a termékben. 4. példa L-Tirozil-D-aianil-glicil-N’-metil-L-fenil-alanii-N’-metil-L-metionil-amid-hidroklorid-trihidrát A) NMercier-butoxi-karbonil-N’-metil-L-fenil-alanin-N,N-diciklohexil-ammóniumsó 80 ml vízmentes tetrahidro-furánhoz hozzáadunk 5,3 g (0,02 mól) NMercier-butoxi-karbonil-L-fenil-alanint. Körülbelül 10 Cc hőmérsékletre hütjük az oldatot, és hozzáadunk 10 ml vízmentes dimetil-formamidot és 0,5 g 18-korona-6-étert. Az ily módon nyert élégyhez lassan hozzáadagolunk (0,060 mól kálium-hidridet tártalmazó) 10,15 g olajos káíium-hidrid-diszperzíót. Utána 0 C° hőmérsékletre hűtjük az elegyet, és hozzáadunk 1,24 ml (0,020 mól) metii-jodidot. Ezután, 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Másnap jégre öntjük és dietil-éterrel kirázzuk. Citromsavval pkí = 2-re savanyítjuk a vizes oldatot, majd etil-acetáttal kirázZiik. Vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot, vízmentes magnézium-szulfáton megszáritjuk, majd lédesztilláijúk az oldószert. A maradék olaj nem kristályosítható. Ezen olajos termék NMR-spektrűma összhangban van a várt szerkezettel. Az NMR-spektrum jellemző sávjai: 8 = =2,72, N —CH3; 8=1,35, C(CH3)3. Dietil-éterbeií feloldjuk a fenti olajos terméket, és hozzáadunk 4,0 ml diciklohexil-amint. Lehűléskor a termék kikristályosodik. Kiszűrjük a kivált anyagot, és metanol és dietil-éter elegyéből átkristályosítjuk, ily módon 6,& g-nyi (74%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 171—174 C, [k]£ =—22,0° (c=l, metanol). Analízis a C27F144N204 képlet alapján (460,66): számított: C 70,40%; H 9,63%; N 6,08%; talált: C 70,60%; H 9,49%; N 6,19%. B) N’-Tercier-butoxi-karbonil-N’-metil-L-fenil-alanil-N^-metil-L-metionil-amid 1,98 g (0,010 mól) N’-metil-L-metionil-amid-hidroklorid 30 ml vízmentes dimetil-formamiddal készült oldatához hozzáadunk 4,16 g (0,010 mól) NMercier-butoxi-karbonil-N’-metil-L-fenil-alanint. 5 perces keverés után 0 C° hőmérsékletre hűtjük az elegyet, majd hozzáadunk 1,35 g (0,010 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt és 2,06 g (0,010 mól) N,N'-diciklohexil-karbodiimidet. 2 órán át 0 C'J hőmérsékleten, majd 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Kiszűrjük a csapadékot, és a szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. A maradékként nyert szirupszerű anyagot etil-acetátban feloldjuk, majd egymás után 1 normál citromsav-oldattal, majd végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Az ily módon nyert szirupszerű anyagot kloroformban feloldjuk, és egy szilikagéllel (60—200 mesh) töltött, 3 x 50 cm méretű oszlopra visszük fel az oldatot. Először kloroformmal, majd kloroform és metanol 9,75 : 0,25 arányú elegyével mossuk az oszlopot. Vékonyrétegkromatográfiával vizsgáljuk az oszlopról lejövő frakciókat, és a megfelelő frakciókról csökkentett nyomáson egyesítve, ledesztilláljuk az oldószert. Ily módon 1,34 g szirupszerű anyagot nyerünk, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
