180723. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fáldalomcsillapító hatású pentapeptid-származékok előállítására
21 180723 22 Cj N'^-Tercíer-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-L-alanil-L-fenil-alanil-N^-metil-L-metionil-amid 10 ml vízmentes dimetil-formamidhoz hozzáadunk 0,692 g (0,002 mól), az 1. példa H) pontjában leírt módon nyert L-fenil-alanil-N^-metil-L-metionil-amid-hidrokloridot. 0 CL hőmérsékletre hűtjük az elegyet, és hozzáadunk 0,28 ml (0,002 mól) trietil-amint. 10 perces kevertetés után az elegyhez hozzáadunk 0,846 g (0,002 mól), a B) pontban leírt módon nyert terméket, majd 0,270 g (0,002 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt, és végül 0,412 g (0,002 mól) N.N'-diciklohexil-karbodiimidet. 2 órán át 0 C hőmérsékleten, majd 48 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána megint 0 Cr hőmérsékletre hűtjük, kiszűrjük a csapadékot és a szűrletröl csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot, és egymás után I normál nálrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, hideg, 0,75 normál citromsav-oldattal és végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Ily módon 1,6 g nyersterméket nyerünk. Kloroformban feloldjuk a nyersterméket, és felvisszük két preparatív vastagréteglemezre az oldatot, majd kloroform és metanol 9 : 1 arányú elegyében kromatografáljuk. Mindkét lemezről lekaparjuk a főterméket tartalmazó szilikagélt, és kloroform és metanol elegyével leoldjuk róla az anyagot. Az 1,3 g súlyú terméket újra feloldjuk, és egy vastagréteglemezen újra kromatografáljuk. Ily módon 1,0 g-nyi (70%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, amorf szilárd anyag formájában, -25,6 (c-0,5, metanol). Analízis a C3sHJ()N603S képlet alapján (714,88): számított : C 58>0° : H 7,05% : Nil ,76% ; talált: C 58,60%: H 6,87%: N 11,53% D) L-Tirozil-D-alanil-L-alanil-L-fenil-alanil-N’1- -metil-L-metionil-amid-hidroklorid-monoacetát 5 ml jégecet és 0,5 ml anizol elegyéhez hozzáadunk 0,880 g (0,0011 mól), a C) pontban leírt módon nyert terméket. 20 percen át egy gázelosztó csövön keresztül vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe. Utána megfagyasztjuk az elegyet, és fagyasztva szárítjuk. Ily módon 0,704 g-nyi mennyiségben nyerjük a kívánt terméket. — 16,2 (c==0,5, metanol). Analízis a C10H4,Nf,O6S. 1.25HCI .C2H402 képlet alapján (719,14): számított: C 53,43%: H 6,45%: N 11,68%: Cl 6,16%; talált: C 53,48%: H 6,47%; N 11,62%; Cl 6,50%. Az aminosav-analízis talált értékei: tirozín: 1,00; alanin: 1,99; fenil-alanin: 1,01. 6. példa L-Tirozíl-D-alanil-giicii-L-fenil-alanil-L-N' -metil-S-etil-ciszteinil-amid-acetát A) N*-Tercier-butoxi-karbonil-S-etil-L-cisziein-diciklohexil-ammóniumsó 400 ml dimetil-formamidhoz hozzáadunk 50 g (0,336 mól) L-(S-eti!)-ciszteint, majd 44,8 ml (3,33ő mól) tetrametil-guanidint és 66,8 ml (0,336 mól) diciklohexil-amint. Ezután egy óra alatt az elegyhez csepegtetünk 68 ml (0,50 mól)azido-szénsav-tercier-butil-észtert, majd 48 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Kiszűrjük a kivált diciklohexil-ammónium-azidot, és a szűrletröl csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Dietil-éter és víz kétfázisú elegyében feloldjuk a desztillációs maradékot, és a vizes rész pH-ját 8,0-ra állítjuk be. Elválasztjuk a szerves részt és elöntjük. Ezután hideg, hígított sósav-oldattal pH ^2-re állítjuk be a vizes részt, és hideg etil-acetáttal kirázzuk. Vízzel kimossuk, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk az etil-acetátos oldatot és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Dietil-éterben feloldjuk a maradékot, és hozzáadunk 66,8 ml (0,336 mól) diciklohevil-amint. Kiszűrjük, és etil-acetátból átkristályosítjuk a kivált csapadékot, ily módon 32,8 g (23%) menynyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 156—159 C , [a]o = — 1,1 (c - - I, metanol); = — 7,7" (c I, metanol). Analízis a C22H42N204S képlet alapján (430,6): számított: C 61,36%; H 9,83%: N 6,51%; talált: C 61,37%; H 9,98%: N 6,26%. 8) N*-Tercier-butoxi-karbonil-N-metil-S-etil-L-cisztein-amjd 50 mi vízmentes tetrahidro-furánhoz hozzáadunk 18,58 g (74,3 millimól), az AJ pontban leírt módon nyert termék semlegesítése és etil-acetátos kirázása útján nyert NMercier-butoxi-karbonil-S-etil-L-ciszteint. Ezután 42,45 g 22,1%-os, ásványi olajjal készült kálium-hidrid-diszperzió (0,234 mól kálium-hidrid), 0,35 g 18- -korona-6-éter és 375 ml tetrahidro-furán elegyéhez 0 C hőmérsékleten fél óra alatt hozzácsepegtetjük a fenti módon nyert oldatot, mechanikus keverés közben. Utána 15—20 perc alatt hozzáadunk az elegyhez 9,25 ml (0,149 mól) metil-jodidot, 20 ml tetrahidro-furánnal hígítva. Másfél órán át 0 C” hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd hozzácsepegtetjük 7,5 ml ecetsav és 7,5 ml tetrahidro-furán elegyét, és utána 5 ml etanolt. Jégre öntjük a reakcióelegyet, majd 2 normál nátriumhidroxid-oldat hozzáadásával körülbelül 9-re állítjuk be az elegy pH-ját. Dietil-éterrel kirázzuk a vizes oldatot, majd szilárd citromsav hozzáadásával 3-ra állítjuk be az oldat pH-ját. Utána megint kirázzuk háromszor 300—300 ml dietil-éterrel, a dietil-éteres oldatokat egyesítve vízzel mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. 200 ml dietil-éterben feloldjuk a desztillációs maradékot, és az oldathoz hozzáadunk 9,56 ml (74,3 millimól.) d(+)-a-metil-benziI-amint. Lehűtjük az elegyet, és hozzáadunk 500 ml petrolétert. A termék ekkor nem kristályosodik ki. Csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószereket, majd petroléterben feloldjuk a maradékot. —78 CJ hőmérsékletre hűtjük az oldatot, ekkor kismennyiségű csapadék válik ki, amelyet kiszűrünk (2,74 g). Csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert a szűrletröl, és dietil-éterben újra feloldjuk a maradékot. 1 normái citromsav-oldattal kirázzuk a dietil-éteres oldatot, a szerves részt vízzel visszarázzuk, vízmentes magnézium-szulfáton megszáritjuk és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Ily módon 6,56 g (33%) szirupszerű anyagot nyerünk, [z]q - — 61,1 (c -1, etanol), NMR-spektrumának jel-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
