180515. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ergot-alkaloidok elválasztására és/vagy arányuk beállítására
9 180515 10 tében a B-fázis áramlási sebességét annál inkább kell növelni az A-fázis áramlási sebességének rovására, minél nagyobb ergokornin fölösleg eltávolítására van szükség. A c2) eljárásváltozat esetében fordított értelmű beavatkozással érhetjük el a megfelelő eredményt. A találmány szerinti eljárást közelebbről az alábbi példákkal szemléltetjük anélkül, hogy igényünket a példákra korlátoznánk. 1. példa Ergokornin, a-ergokriptin, és ß-ergokriptin arányának beállítása 100 g alkaloidkeveréket, melynek összetétele 71,33% ergokornin, 9,02% a-ergokriptin, 4,01% ß-ergokriptin és 15 súly% kristálybenzol, 1000 ml kloroformban oldunk (a továbbiakban alkaloidoldat). Egyidejűleg elkészítjük a kétfázisú extrahálószert : 6 liter víz és 3 liter formamid elegyében 180 g d-borkősavat oldunk, majd az oldathoz 4 liter kloroformot keverünk, míg a fázisok 20—25 °C-on egymásra nézve telítettek lesznek. Ezután a fázisokat szétválni hagyjuk (a kloroformos fázist a továbbiakban A-fázisnak, a vizes formamidos fázist a továbbiakban B-fázisnak nevezzük). Az extrakciót RDC-rendszerű (Rotating diso column) folyamatos ellenáramú, forgótárcsás folyadék-folyadék extraktorban 20—25 °C hőmérsékleten végezzük. Az extraktor-oszlop belső átmérője 30 mm, az extraktorba épített szűkítő tárcsa átmérője 20 mm, a forgótárcsa átmérője 15 mm, a keverőtengely átmérője 6 mm, cellamagasság 11 mm, az ülepítőtér szerepét betöltő felső 0. cella és az alsó 61. cella hossza 150—150 mm, az aktív cellák száma: 60, és a keverő fordulatszáma 500/perc. Az extraktort középső beadagolással üzemeltetjük: a 20. cellába 0,5 l/ó sebességgel az alkaloid-oldatot, a 0. cellába 1,5 l/ó sebességgel az A-fázist, és a 61. cellába 3,58 l/ó sebességgel a B-fázist tápláljuk be, s értelemszerűen a kilépő, az alkaloidokat egyre inkább a kívánt arányban tartalmazó A-fázist az extraktor alján, illetve a kilépő B-fázist az extraktor tetején külön-külön szedőedényekbe gyűjtjük. Mindkét szedőedényben az összalkaloid-koncentrációt, és az egyes alkaloidok mennyiségét folyadékkromatográfiás módszerrel határoztuk meg (készülék: Varian 8500 LC; adszorbens: Lichrosorb S 1 60 5; eluens: n-hexán: kloroform: acetonitril 7:1,5:1,5 arányú elegye; áramlási sebesség: 100 ml/óra; detektálási hullámhossz: 280 nm). 30—45 perces felfutási periódus után a kilépő extraktumok összetétele állandósul, azaz az extraktor egyensúlyi működésűnek tekinthető. Ekkor szedőedényt cserélünk, és az extraktort gyakorlatilag tetszésszerinti ideig üzemeltetve, a szedőedényekbe mindig az egyensúlyi összetételű kilépő extraktumokat gyűjtjük. 500 ml alkaloidoldat betáplálásának megfelelő mennyiségű kilépő extraktum-adagokat (2000 ml a kilépő A-fázis és 3600 ml a kilépő B- fázis térfogata) dolgozunk fel a következőképpen: A 2000 ml kilépő A-fázist kétszer 500 ml 2%-os vizes ammóniumhidroxid-oldattal formamidmentesítünk, majd a formám idmentes kloroformos oldatot nátriumszulfáttal vízmentesítjük, szűrjük, és a ; zűrletet csökkentett nyomáson, maximum 40 CC hőmérsékleten szárazra pároljuk. Kitermelés: 11,87 g alkaloidkeverék, mely 47,69 súly% ergokornint, 32,9 súly% aergokriptint cs 15,l%ß-ergokriptint tartalmaz, mely gyakorlatilag megfelel a célkitűzés szerinti 3:2:1 ergokornin: a-ergokriptin : ß-ergokriptin aránynak. A 3600 ml kilépő B-fázis — amely a kiindulási alkaloid-oldatban lévő, és a kilépő A-fázisban lévő 3:2:1 arányú alkaloidmennyiség különbözetét., főként a fölös mennyiségű ergokornint tartalmazza — pH értékét 8-ra állítjuk be, majd kétszer 500 ml kloroformmal extraháljuk. A kloroformos fázisokat egyesítjük, 2%-os vizes ammóniumhidroxid-oldattal formamidmentesítjük, majd nátriumszulfáttal vízmentesítjük, szűrjük és a szfirletet szárazra pároljuk. Kitermelés :32,23 g alkaloidkeverék, mely 91 súly% ergokornint, 2,75 súly% a-ergokriptint és 0,9 súly% ß-ergokriptint tartalmaz. Az így kapott alkaloidkeverék kloroformos oldata újra extrahálható, vagy kívánt esetben komponenseire bontható és az alkaloidok arányának korrigálására felhasználható. 2. példa Ergokornin, a- és ß-ergokriptin arányának beállítása és ergotamin mentesítése 100 g ergotalkaloid keveréket, melynek összetétele 56,88 súly% ergokornin, 19, 21 súly% a-ergokriptin, 8,96 súly% ß-ergokriptin, 1,21 súly% ergottamin és 13,74 súly% kristálybenzol, 1000 ml kloroformban oldunk. Az extrahálószert 4 liter víz, 2 liter formamid, 120 g d-borkősav és 3 liter kloroform felhasználásával az 1. példában leírt módon készítjük és azonos extrakoiós készülékben alkalmazzuk. Az alkaloid-oldatot a 20. cellába 0,5 liter/óra, az A-fázist a 0,cellába 1,12 liter/óra és a B-fázist a 61. cellába 2,46 liter/óra sebességgel tápláljuk be. A továbbiakban az 1. példában leírt módon járunk el. Az 500 ml alkaloid-oldat betáplálásnak megfelelő mennyiségű kilépő extraktumokból a következő termékeket kapjuk: A kilépő A-fázisból : 25,65 g kívánt arányú alkaloidkeverék, melynek összetétele 46,50 siily% ergokornin, 32,55 súly% a-ergokriptin és 15.99 súly% ß-ergokriptin. A keverék ergotamin-tartalma 0,1 súly% alatt van. A kilépő B-fázisból: 19,29 g alkaloidkeverók, mely főként a fölös mennyiségű ergokornint tartalmazza. A keverék összetétele 85,72 súly% ergokornin, 6,49 súly% a-ergokriptin, 1,97 siily% ß-ergokriptin és 3,0 súly% ergotamin. 3. példa Ergokornin, a- és ß-ergokriptin arányának beállítása és ergotamin mentesítése 100 g ergotalkaloid keveréket, melynek összetétele 77,09 súly% ergokornin, 7,12 súly% a-ergokriptin, 2,84 súly% ß-ergokriptin, 3,12 súly% ergotamin és 9,87 súly% kristálybenzol, 1000 ml 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
