180283. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunstimuláns di-O-N-alkil-glicerin-származékok előállítására
180.283 Egereket intraperitoneálisan konyhasóoldattal vagy a vizsgálandó vegyülettel oltjuk be. A makrofágokat 72 óra múlva gyűjtjük össze olyan módon, hogy 3 ml Q% borjuszérum - 92% RPMI médiumot /Grand Island Biological Co., N.Y./ /1640g2FCSg/ éa 5 E/ml hepar int fees kendőzünk be intraperitoneáliaan az állatokba /az összes médium hőmérsékletét 37°-on tartva/, a beadott anyagokkal 1-2 percig átmossuk a hasüreget, majd a hasfal felnyitása után az összes peritoneális folyadékot steril, szilikonozott pipettával leszívjuk jég között tartott plasztik csőbe. A mákrofágokát hemocitométerrel leszámoljuk és koncentrációjukat 1640^2PCSg médiummal 1,5.10°/ml-re állítjuk be. A sejteket ezután sok kis vályút tartalmazó lemezekbe helyezzük, vályúként 1j5•106 sejtet, és 1-2 óra hosszat 37°-on szén-dioxid-atmoszféraban inkubáljuk. A felüluszót elöntjük és a sejteket egyszer a médiummal lemossuk, mivel a nakrofágok a vályúk alján letapadva maradnak. Ezután ÍCáO^FCSg médiumban szuszpendált L 1210 daganatsejteket /DBA-egereK aszciteszéből izolálva mintegy 5 nappal a beoltás után/ adunk a letapadt makrofágokhoz /I ml 1.105 sejt per ml szuszpenziót minden vályúhoz/ és 37°-°ű 24-30 órán át 5 % COg-atmoszférában inkubáljuk. A sejteket ezután ^II-timidinnel /1,0 Ci per ml; Amersham-Searles/ inkubáljuk 37°“°n, a felüluszót leszívjuk, Reeve-Angel szűrővel a sejteket összegyűjtjük és ötször konyhasóoldattal mossuk. A szürőkorongokat száradni hagyjuk és szcintillációs küvettákba helyezzük LSC szcintillációs folyadékkal /5,0 g PRO és 0,2 g POPOP per liter toluol; Yorktown Researoh/. A beűtésszámot Beckman LS-250 folyadék-azclntillátor segítségével 2 percig mérjük. A kapott eredmények a következők* 2» táblázat VIII általános képlet Dózis /mg per kg/ DNS-szintézis gátlása % a“C10H21 1,25 76 d_C10H21 0,625 94 n_G10H21 0,313 56 7. példa Perifériás vérben a monociták aktiválásának vizsgálata Patkányokat intravénásán a vizsgálandó vegyülettel, vagy a kontrollomat konyhasóoldattal oltjuk be. A monocitákat 72 6- ra múlva gyűjtjük össze olyan módon, hogy 2 ml vért EDTA-t tartalmazó csőbe szívunk le és 2 ml konyhasóoldattal hígítjuk. Erre óvatosan 3 ml LSM-et /"Lymphocyte Separation Medium"; Bionetica/ rétegezünk és percenkénti 800 fordulattal 40 peroig szobahőmérsékleten centrifugáljuk. Pipettát használunk a monocitákat és limfocitákat tartalmazó homályos középső réteg összegyűjtésére. E sejteket kétszer "Hanks Balanced Salt Solution"—nal mossuk, 1640^2FCSg médiumban reszuszpendáljuk, sok kis vályút 8
