180210. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és berendezés enzimszubsztrátum koncentrációjának folyamatos meghatározására
180210 szövetségi koztársaségbeli nyilvánosságra hozatali iratból is-, meretes. Előnyösen cirkuláló pufferoldatot alkalmazunk, ha ennek regenerálása lehetséges, es/vagy a felhalmozódó anyagok az enzim számára elviselhetók. A minta előnyösen folytonos bevezetése során ezt célszerűen egy dializálómembránon át hozzuk érintkezésbe a pufferoldatárammal, úgy hogy a vizsgálandó anyag a pufferoldatba bedializálhat. Ezen a piódon más nemdislizáló anyagok, amelyek az enzimmel való érintkezéskor vagy a mérőkamrában zavarokat okozhatnának, kizárhatók. Kivánt esetben az is lehetséges, hogy a meghatározandó mintát közvetlenül a pufferoldat áramba vezessük be. Az utóbbi esetben a mintát előbb célszerűen pufferoldat, heparinoldat vagy hasonló hozzáadásával annyira meghigitjuk, hogy a szuszpendált szilárd anyagok miatt az immobilizált enzimmel való érintkezéskor vagy a mérőkamrában semmilyen zavar ne léphessen fel, és a meghatározandó anyag koncentrációja a detektor méréstartományába illeszkedjék. Az immobilizált enzim eldugulása miatti zavarok elkerülhetők, amennyiben lehetőleg nyitott keresztmetszeteket választunk, például enzimszakaszként enzimatikusan aktiv felülettel rendelkező tömlőt. Az előhigitás célszerűen úgy történik, hogy a mintát először egy pufferoldat-oldalágáramba adagoljuk be, és ezt azután a puffer főáramával keverjük. A mintát tartalmazó pufferoldatot addig áramoltathatjuk a mérőkamrán át, amig állandó vonatkozási jelet illetve mérőjelet kapunk, ez azonban nem szükséges mielőtt ismét átkapcsolunk. Az enzimreakciónak szintén nem kell teljesen lefutnia, maradhat még jelen szubsztrátum az immobilizált enzimen történt átengedés után. Cirkuláló pufferoldat esetén az elreagálatlan szübsztrát egy későbbi reakcióban további immobilizált enzimmel teljesen éltávolitható. A pufferoldatban lévő eg;yéb anyagokat, amelyek a mérőkamrán történt átengedés után uj mérés esetén zavarhatnak, célszerűen szintén nem zavaró anyagokká alakitjuk át, vagy eltávolítjuk. Ez például alkalmas- immobilizált enzimmel történő további érintkezéssel sikerülhet. Az eljárás egy különösen célszerű kivitelezési formája emellett a sorrend fentebb említett megfordítása, amelyben az enzimet és a mérőkamrát átáramoltatjuk, amelynek során mintaoldatot, amely immobilizált enzimmel történő előzetes érintkezés nélkül közvetlenül a mérőkamrába jut, és igy még az összes enzimszubsztrátumot tartalmazza. végül az immobilizált enzimmel hozzuk érintkezésbe', és igy távozik. Amennyiben mégis olyan körülményeket választunk, amelyek nem vezetnek a szubsztrát, tehát például a glükóz tökéletes elreagálásához, úgy ebben az esetben immobilizált enzimmel egy további érintkeztetést végzünk. Amennyiben az enzimatikus reakció során olyan anyagok keletkeznek, amelyek a mérőreakciót befolyásolják vagy ezeket is méri, ezeket előnyösen Ismét eltávolitjuk a pufferoldatból, például adszorbeálószerrel vagy/és ioncserélőval. Ilyen eset lép fel például vezetőképességméréseknél. A találmány szerinti eljárás azonban lehetővé teszi, hogy a zavaró anyagok ilyenfajta eltávolitása nélkül is cirkulációs folyamatban dolgozzunk, mivel mindenegyes cirkulációs folyamat esetén uj bázismérőjel jön létre, amely a szubsztrátmérőjel részére vonatkozási pontként szolgál, és igy zavaró anyagok felhalmozódásának a meghatározásra gyakorolt befolyását önmaga kiküszöböli. Egy eljárási ciklus időtartama, tehát az egyik átkapcsolástól a következőig terjedő ide függ a pufferoldat áramlási 4
