180159. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tiazolo-piridazin- származékok előállítására
180159 Az /I/ általános képletü triazolo-piridazin-származékok angiotenain-átalakitó enzimet gátló hatását ln vitro az alábbi teszttel igazoljuk.: A teszt-módszer Cushman és Cheung módszerén alapul / Biochem. Pharmacol. 20, 1637-1648/, Hayakari és tsal módosításainak /Anal. Blochern. 84, 301-369/ figyelembevételével. A szubsztrátumot /hlppur11-hTsztldil-leucin. 2 millimól/ különböző koncentrációjú teszt-vegyület jelenlétében vagy anélkül 300 millimól nátrium-klór időt tartalmazó kálium-foszfát-pufferben /pH 8,3j 100 millimól/ 25 percen át 37 C-on ACE-el inkubáljuk /összérték 500 ul/. Â reakciót(3 ml kálium-foszfát-puffér /pH 8,3, 200 millimól/ 0 C°-on történő hozzáadásával megszakítjuk. Ezután 1,5 ml 3%-os dioxános 2,4,6-trj klór-sz-triazin-oldattal elegyitjük, majd a kapott elegyet a sárga kromofor teljes kifejlődéséig rázatjuk. A mintákat a keletkező szilárd anyag eltávolítása céljából centrifugáljuk. A 2,4,6-triklór-sz-triazin és a szabad hippursav reakciója során keletkező sárga kromofort 382 nm mellett spektrofotometriásán megmérjük. ICTM értéknek a teszt-vegyület azon koncentrációját tekintjük, mely a hippurilhiaztidil-leucin ACE által történő fenti megbontásának 50 %-os csökkentéséhez szükséges. Teszt-vegyület kent az /I/ általános képletü vegyületek alábbi reprezentatív képviselőit alkalmazzuk: A-vegyület » 5-karboxi-2,3,5|8-tetrahidro-l,3-dioxo-lH-l, 2,4-triazolo/1,2-a piridazin-2-proplonsav{ B-vegyület = 2-/2-karbamoil-etil/-2,3,5,8-tetrahidro-lf3- -dioxo-lH-1,2,4-tr lazolo.' 1,2-a / pir i dazin-5-kar bons av ; C-vegyület = 2-/2-/F-hidroxi-karbamoil/-etil7-2,3,5»8-tetrahidro-l,3-dioxo-lH-l,2,4-tr iazolo/1 l,2-aJpiridazin-5-karbons av ; D-vegyület » 2-/2-merkapto-etil/-2,3»5»8-tetrahidro-l,3- -tti oxo- 1H-1,2,4-1 r i az o 1 o /1,2- a 7 p i r 1 daz in- 5- kar bonsav. A kapott eredményeket az alábbi táblázatban foglaljuk öazsze: Teszt-vegyület IC50 /mól/ A 1,8 x 10“5 B 6,5 x 10-5 0 5,5 x KT6 D 4,8 x 10“7 Az /!/ általános képletü vegyületeket és gyógyászatilag alkalmas sóikat a gyógyászatban a hatóanyagot és megfelelő hordozóanyagokat tartalmazó gyógyászati készítmények alakjában alkalmazhatjuk. Hordozóanyagként enterália /pl. orális/ vagy parenterália adagolásra alkalmas, szerves vagy szervetlen hordozóanyagokat alkalmazhatunk, igy pl. viz, zselatin, gumlarablkum, laktóz, keményítő, magnézium-sztearát, talkum, növényi olajok, polialkilénglikólók, vazelin stb. jöhetnek tekintetbe. A gyógyászati készítményeket szilárd /pl. tabletta, drazsé, kúp vagy 11
